Файл: Practicum_po_microbiologii.doc

а) посев на питательные среды: свернутая желточная среда Мак-Коя; МПА с 0,1 %, 1 % глюкозы, 5-10 % дефибринированной кроличьей сывороткой, среда Френсиса и др.

б) особенности выделения культуры:

- аэробы,

- оптимальная температура 37°,

- срок культивирования 2-3 сут;

в) культуральные свойства:

- на плотных средах – блестящий тонкий налет или мелкие блестящие выпуклые колонии,

- на жидких средах – растет на поверхности в виде налета;

г) биохимические свойства:

- обладает слабыми сахаролитическими свойствами (расщепление до кислоты), образует сероводород, восстанавливает некоторые красители.

4. Биопроба:

- заражают подкожно или внутрибрюшинно белых мышей и морских свинок.

Б. Серологическая диагностика:

- используют РА, РНГА, РИФ.

В. Аллергическая диагностика:

- в качестве аллергена применяют тулярин, который вводят внутрикожно, реакцию учитывают через 24 и 48 ч.

5. Биопрепараты для специфической профилактики:

- в медицине применяют живую вакцину против туляремии,

- для с.-х. животных вакцину не выпускают.

6. Биопрепараты для специфической терапии:

- отсутствуют.

Задания дли самостоятельной работы

1. Изучить культуральные особенности возбудителя туляремии на питательных средах.

2. Приготовить препараты из туляремийного антигена окрасить по Граму и микроскопировать.

Тема 38. Возбудитель бруцеллеза

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства возбудителя и методы микробиологической диагностики бруцеллеза/

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы схема микробиологической диагностики бруцеллеза, таблицы (морфология бруцелл), микроскопические препараты – мазки, окрашенные по методу Козловского и по Граму, пробирки с положительной и отрицательной кольцевой реакцией с молоком, биопрепараты, пробирки с культурой бруцелл (вакцинный штамм) на питательных средах (мясо-пептонный печеночный бульон – МППБ, мясо-пептонный печеночный глюкозо-глицериновый агар – МППГГА, МППБ и МППГГА с 10 % глюкозой и 2-3 % глицерином), труп морской свинки, павшей после заражения вакцинным штаммом бруцелл, бруцеллезная сыворотка, бруцеллезный антиген, взвесь бруцелл, кишечной палочки.

При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:

1. Виды возбудителя бруцеллеза, морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические особенности бруцелл.

2. Схема бактериологической диагностики бруцеллеза.

3. Серологическая диагностика бруцеллеза.

4. Специфическая профилактика бруцеллеза.

1. Классификация возбудителя

Род: Brucella

Виды: Вг. melitensis(овец и коз)

Вг. abortus (крупного рогатого скота)

Вг. suis (свиней)

Вг. suis (4 биовар) бруцеллез северных оленей

Вг. canis (собак)

Вг. ovis (инфекционного эпидидимита баранов)

Вг. neotomaе (кустарниковых крыс).

2. Общая характеристика болезни:

Бруцеллез – хроническая инфекционная болезнь, у животных протекает в скрытой форме, происходят массовые аборты, задержание последа, метриты и др.

3. Восприимчивые животные:

- многие виды с.-х. и диких животных, включая человека.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- возбудитель в организм проникает алиментарным и половым путями,

- бруцеллы вначале размножаются в ближайших лимфатических узлах, далее проникают во внутренние органы, инфекция принимает генерализованный характер. Наиболее благоприятную среду для размножения бруцеллы находят в беременной матке, что приводит к эндометриту, нарушению питания плода и аборту. Плодные оболочки многих животных содержат эритриол – фактор роста бруцелл,

- факторами вирулентности у бруцелл являются эндотоксины и ферменты патогенности — гиалуронидаза, каталаза, уреаза.

Методы диагностики (рис. 101):

А. Бактериологический метод:

1. Материал для исследования:

- абортированный плод с оболочками, желудок, печень, почки плода, молоко и др.

Рис. 101. Схема лабораторной диагностики бруцеллеза

2. Микроскопия:

а) методы окраски: по Граму, по Козловскому

окраска по Козловскому:

- 2%-ный раствор сафранина (при подогревании) – 2 мин;

- промыть водой;

- 2%-ный раствор малахитовой зелени – 2 мин.

Бруцеллы окрашиваются в красный цвет; ткани, форменные элементы, другие бактерии – в зеленый.

б) микрокартина: мелкие коккобактерии (0,3-0,6 мкм) или мелкие палочки (0,6-2,5 мкм), располагаются одиночно, парами и небольшими группами (рис 102);

в) грамотрицательные;

г) спор не образуют;

д) капсулу не образуют;

е) неподвижны.

3. Культивирование:

а) посев на питательные среды – мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ), мясо-пептонный печеночно-глюкозо-глицериновый агар (МППГГА), печеночно-глюкозо-глицериновый бульон и агар (МГГБ и МГГА) с 10%-ной глюкозой и 2-3%-ным глицерином.

б) особенности выделения возбудителя:

- микроаэрофилы;

- выращивают в атмосфере 10-15 % СО₂ (Вг. abortus, Вг.ovis в первой генерации);

- остальные виды бруцелл – аэробы;

- оптимальная температура 37°С;

- срок культивирования от 15 до 30 дн.

в) культуральные свойства:

- на жидких средах – равномерное помутнение, пристеночное кольцо, незначительный осадок;

- на плотных средах – мелкие, прозрачные с ровным краем колонии.

г) биохимические свойства:

- сахаролитические свойства выражены слабо;

Рис. 102. Возбудитель бруцеллеза из чистой агаровой культуры. Увеличение, х900

- протеолитические свойства – молоко не свертывают, желатин не разжижают, сероводород образуют Вг.suis, в меньшей степени Вг.abortus

4. Биопроба:

- заражают подкожно морских свинок, белых мышей.

Дифференциацию проводят по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, по бактериостатическому действию красок, РА и вирулентности.

Б. Серологический метод:

- используют РА, РСК, РДСК, РИД-ОПС (РИД с ОПС-антигеном), кольцевую пробу с молоком, Роз-Бенгал пробу.

В. Аллергический метод:

- для диагностики бруцеллеза у свиней используют аллерген бруцеллин ВИЭВ, который вводят внутрикожно с наружной стороны ушной раковины,

- у животных, больных бруцеллезом, на месте введения аллергена развивается воспалительная реакция.

5. Биопрепараты для специфической профилактики:

- для крупного рогатого скота – живые вакцины из штамма 19 и штамма 82;

- для мелкого рогатого скота – живая вакцина из штамма 19.

6. Биопрепараты для специфической терапии:

- отсутствуют.

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить культуральные особенности бруцелл на плотной и жидкой питательных средах. Сравнить культуральные свойства со свойствами других видов бактерий.

2. Приготовить препараты-мазки из органов морской свинки, зараженной вакцинным штаммом возбудителя бруцеллеза. Окрасить по Козловскому и провести микроскопию. Провести дифференциацию бруцеллы от других микроорганизмов.

3. Приготовить препараты из смешанной бактериальной культуры, окрасить по Граму.

4. Провести постановку пробирочной РА на бруцеллез с сывороткой крови крупного рогатого скота.

5. Провести постановку кольцевой пробы с молоком.

Тема 39. Возбудитель сибирской язвы

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства возбудителя и методы микробиологической диагностики.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы таблицы по морфологическим, культуральным свойствам возбудителя сибирской язвы и биопрепараты. Для приготовления препаратов-мазков суточная агаровая культура вакцинного штамма СТИ, реактивы для окрашивания их по Граму, микроскопы; Для приготовления препаратов-отпечатков – печень морской свинки, павшей от вакцины Ценковского, реактивы для окрашивания на капсулу; для постановки реакции преципитации – сибиреязвенный антиген и преципитирующие иммунные сыворотки, преципитационные пробирки в штативах, пастеровские пипетки.

При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:

1. Название возбудителя и его патогенность.

2. Морфологические и тинкториальные особенности возбудителя сибирской язвы.

3. Условия, необходимые для формирования капсул и спор, их биологическое значение.

4. Культуральные особенности возбудителя сибирской язвы.

5. Дифференциация возбудителя сибирской язвы от непатогенных антраксоподобных бактерий.

6. Схема бактериологической диагностики сибирской язвы.

7. Реакция преципитации на сибирскую язву.

8. Компоненты реакции преципитации и особенности ее постановки при сибирской язве.

9. Контроли реакции преципитации при сибирской язве, учет и оценка ее результатов.

10. Специфическая профилактика и терапия сибирской язвы.

1. Классификация возбудителя

Сем.: Bacillaceae

Род: Bacillus

Вид:Bac. anthracis

2. Общая характеристика болезни

Сибирская язва – острая инфекционная болезнь, характеризующаяся септицемией, поражением кожи, (карбункулезная форма), кишечника, легких, миндалин (висцеральная форма).

3. Восприимчивые животные:

- наиболее восприимчивы крупный и мелкий рогатый скот, лошади, олени;

- менее – свиньи;

- более – человек.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- основные пути заражения – алиментарный, аэрогенный, трансмиссивный;

- бациллы, попадая в кровь, вызывают септицемию, интоксикацию организма, потерю способности крови к свертыванию;