Файл: Practicum_po_microbiologii.doc

4. В сушильных шкафах сухим жаром стерилизуют:

А. Стеклянную посуду.

Б. Простые питательные среды (МПА и МПБ).

В. Вату, марлю.

Г. Термостойкие порошкообразные лекарственные вещества.

5. Споры бацилл погибают при:

А. Автоклавировании.

Б. Пастеризации.

В. Стерилизации сухим жаром.

Г. Длительном высушивании.

6. Каким из перечисленных методов стерилизации воспользовались, если применили следующий режим работы: дробная стерилизация при температуре 56-58° в течение 5-6 дней?

А. Автоклавирование.

Б. Пастеризация,

В. Тиндализация.

Г. Кипячение.

7. Каким из перечисленных методов стерилизации воспользовались, если применили следующий режим работы: при 1 атм - 120° в течение 20 мин?

А. Кипячение.

Б. Пастеризация.

В. Автоклавирование.

Г. Дробная стерилизация текучим паром.

8. Какой из методов наиболее приемлем для уничтожения бактериальных культур?

А. Пастеризация.

Б. Автоклавирование.

В. Фильтрование через бактериальные фильтры.

Г. Тиндализация.

9. Каким из перечисленных методов стерилизации воспользовались, если применили следующий режим работы: при температуре 100° в течение трех дней подряд по 30 мин в день?

А. Кипячение.

Б. Автоклавирование.

В. Пастеризация.

Г. Дробная стерилизация текучим паром.

10. Назовите режим работы, применяемый для пастеризации:

А. 100° - 30 мин.

Б. 60° - 20 мин.

В. 80° - 10 мин.

Г. 80° - 30 мин.

11. Назовите нормальный режим работы автоклава при стерилизации инфицированного материала:

А. 80° при давлении в 1,0 атм.

Б. 56° при давлении в 0,5 атм.

В. 126° при давлении 1,5 атм.

Г. 126° при давлении 2,0 атм.

12. Какой из перечисленных методов нужно применить для стерилизации питательных сред с углеводами:

А. Дробная стерилизация текучим паром.

Б. Кипячение.

В. Пастеризация.

Г. Автоклавирование.

13. Каким методом можно пастеризовать сыворотку крови:

А. Кипячением.

Б. Методом тиндализации.

В. Пастеризацией.

Г. Фильтрацией через бактериальные фильтры.

14. Дезинфицирующими веществами являются:

А. Хлорамин.

Б. Эритрин.

В. Стрептомицин.

Г. Фенол.

Д. Бриллиантовая зелень.

Тема 8. Методы посева бактерий на питательные среды (8.1), их культивирование (8.2), выделение чистых культур бактерий (8.3)

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Овладеть техникой посева бактерий на питательные среды, ознакомить с методами их культивирования, освоить методы и приемы выделения чистой культуры бактерий.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Пробирки со смесью бактерий разных видов (стафилококк, вакцинный штамм сибиреязвенной палочки, кишечной палочки). Питательные среды в пробирках: МПБ, скошенный МПА (по числу студентов), МПА (столбиком), среда Эндо, солевой МПА, чашки Петри. Бактериологические петли, шпатели. Предметные стекла, спиртовки, набор красок для окрашивания по Граму. Водяная баня на 100°С. Термостат.

8.1. Техника посевов бактерий на питательные среды

При первичных посевах из исследуемого материала или посева из чистых культур бактерий на питательные среды необходимо соблюдать строгую стерильность, чтобы не занести посторонних микробов. Все работы по посевам и пересевам бактерий проводятся в специальных помещениях (в боксах). Инструментами для посева и рассева микроорганизмов служат бактериологические петли, иглы, шпатель (рис. 22).

При посеве бактерий на питательные среды или пересеве из одной пробирки в другую соблюдают следующий порядок. Вначале в пламени горелки стерилизуют петлю и петледержатель, который при посеве входит в пробирку. Пробирку с чистой культурой со стерильной скошенной средой берут в левую руку в наклонном положении так, чтобы пробирка с культурой была первой по отношению к работающему. В правую руку берут, как писчее перо, петлю и, держа ее вертикально, прокаливают в пламени горелки. Ватные пробки захватывают мизинцем правой руки, вынимают и держат их во время посева в таком положении. Ни в коем случае не допускается класть пробки на стол. Обжигают края открытых пробирок в пламени горелки и вводят стерильную петлю в пробирку с культурой. Петлю охлаждают о внутреннюю стенку пробирки, прикасаются к участку незасеянного агара и, если он не плавится, прикасаются к поверхности культуры бактерий. Пробирку слегка отодвигают от пламени, предохраняя материал от сжигания. Быстро, но осторожно, переносят петлю в пробирку со стерильной средой, опускают, до конденсационной воды, и зигзагообразными движениями распределяют материал по скошенной поверхности агара. Извлекают петлю, обжигают края пробирок и вставляют обожженные пробки, затем стерилизуют петлю (рис. 23).

Рис. 22. Инструменты для посева и пересева микробов:

1 – бактериологическая петля;

2 – бактериологическая игла;

3 – шпатель

Рис. 23. Пересев из одной пробирки в другую

Посев на плотные среды в чашках Петри проводят бактериологической петлей или стеклянным шпателем. Крышка чашки с агаровой средой приподнимается левой рукой, но полностью не открывается, наносится капля исследуемого материала и растирается на поверхности среды (рис. 24).

Рис. 24. Посев шпателем в чашку Петри с плотной питательной средой

При посеве уколом пробирку с агаром или желатином (среда разлита в виде столбика) держат дном вверх или под углом. Посев производят бактериологической иглой, которой прокалывают питательную среду до дна (рис. 25). Посев уколом в столбик применяется для выращивания анаэробов, выявления протеолитических свойств, а также с целью длительного хранения культур.

Для посева в жидкие среды пользуются петлей, стерильными градуированными или пастеровскими пипетками. Техника посева на жидкие среды петлей аналогична технике посева на скошенный агар, но материал на петле растирают по стенке пробирки и смывают питательной средой.

При пользовании пастеровской пипеткой кончик капилляра отламывается прокаленным пинцетом, пипетку проводят через пламя. На другой конец пипетки надевают резиновый баллончик и опускают ее в пробирку с жидким исследуемым материалом. Небольшое количество материала набирают путем легкого нажатия на баллончик и переносят материал в пробирку с незасеянной питательной средой, выдувая его с помощью груши.

После посева пастеровские пипетки помещают в дезинфицирующий раствор.

Рис. 25. Посев уколом в агар столбиком

8.2. Методы культивирования бактерий

Для успешного культивирования бактерий, кроме правильно подобранных сред и проведенного посева, необходимы оптимальные условия: температура, влажность, аэрация. В среднем температура для культивирования большинства микробов должна быть в пределах 37-38 °С.

Для выращивания микробов в лабораторных условиях используют специальный аппарат - термостат, в котором поддерживается постоянная и определенная температура (рис. 26).

Термостаты бывают различного устройства и размера. Термостат представляет собой шкаф с полками внутри и открывающейся дверцей, сделанные из теплоизолирующих материалов. Источником нагрева в современных термостатах являются электронагревательные элементы, которые прогревают воздух или воду.

Существенной частью любого термостата является система терморегуляции, которая обеспечивает поддержание температуры на оптимальном уровне. Датчиком температуры в большинстве термостатов является ртутный контактный термометр с магнитной головкой. Такой термометр имеет два контакта, один из которых представляет собой платиновую подвижную проволоку, заключенную в канал термометра, другой присоединяется к ртути. Уровень температуры по положению подвижного контакта регулируется магнитной головкой. При нагревании термостата выше 37° замыкаются контакты термометра, и сигнал поступает в электронное устройство, которое с помощью реле отключает источники нагрева. При снижении температуры контакты размыкаются и подается сигнал для включения источников нагрева. Таким образом, в термостатах постоянно поддерживается нужная температура.

В больших лабораториях по такому же принципу создаются комнаты-термостаты.

Рис. 26. Различные системы термостатов: сухо-воздушный (А), с водяной рубашкой (Б)

Свет подавляющему большинству патогенных микробов не нужен: их культивируют в темноте. Однако для изучения пигментообразования, которое происходит активнее на рассеянном свету, бактериальные культуры после термостата выдерживают 2-3 дня при комнатном освещении.

Для успешного культивирования бактерий необходимо применять свежие питательные среды, содержащие определенное количество влаги. Особенно это касается использования плотных питательных сред, которые разливают в чашки и скашивают в пробирках в день посева.