Файл: Practicum_po_microbiologii.doc

Мукоровые грибы, или головчатая плесень (Mucor), относятся к фикомицетам – грибам с ветвящимся одноклеточным, пушистым, серовато-сизого цвета мицелием (рис. 44, 1).

В мицелии отсутствуют перегородки. Из мицелия поднимаются вверх спорангии в виде головок, которые содержат эндоспоры.

Пенициллиум, или кистевидная плесень (Penicillium), - род плесени, имеющий большое количество видов. В верхней части конидиеносец разветвлен и формирует кисть из стеригм с цепочками конидий на них (экзоспоры) (рис 44, 2).

Аспергилл, или леечная плесень (Aspergillus), обладает многоклеточным мицелием. На конце плодоносящей мицелиальной нити выступают округлые или булавовидные образования, от которых отходят в радиальном направлении короткие отростки – стеригмы, на конце последних экзоспоры (рис. 44, 3).

Фузариум (Fusarium) – плесень, обладающая мицелием, окрашенным в зависимости от вида гриба в различный цвет (желтый, коричневый и др.). Образует конидии серповидные: одноклеточные – микроконидии, многоклеточные – макроконидии. Гриб может образовывать также хламидоспоры (рис. 44, 5).

Стахиоботрис (Stachyobotrys) – мицелий септирован, многоклеточный, от которого вверх поднимаются споросные гифы конидиеносцы со стеригмами и сидящими на них конидиями. Конидиеносцы бесцветные, гладкие, в верхней части бородавчатые, оливко-бурого цвета (рис. 44, 4).

Рис. 44. Конидии и конидиеносцы у различных родов микроскопических грибов: 1 –Mucor; 2 – Penicillium; 3 – Aspergillus; 4 – Stachyobotrys; 5 – Fusarium

Дрожжевые грибы представляют собой крупные клетки овально-шаровидной формы. Они не образуют мицелия и размножаются различными путями: почкованием, делением, половым путем и эндоспорами, которые располагаются в особых сумках (асках) и называются аскоспорами (рис. 45).

Рис. 45. Дрожжевые грибы

Дрожжеподобные грибы не образуют истинного мицелия. Однако при размножении их клетки располагаются цепочками, вытягиваются в длинные нити, которые называют псевдомицелием.

Для определения токсичности грибов готовят экстракт из пораженного корма и выросшей культуры. Экстрагируют эфиром (можно ацетоном или хлороформом) в аппарате Сокслета или стеклянной банке с притертой крышкой. Экстракт выпаривают в водяной бане при 45-50°С под тягой. Токсичность определяют алиментарно (скармливанием) или постановкой кожной пробы.

Алиментарную пробу проводят на белых мышах, морских свинках, кроликах, цыплятах путем скармливания им исследуемого корма или вытяжки в течение трех дней.

Кожная проба ставится на кроликах. Для этого на свежевыбритый участок (размером 4-5 см²) втирают экстракт. В положительном случае через 1-3 дня отмечается гиперемия, отечность и далее некроз. Биопробу можно проводить на куриных эмбрионах, аквариумных рыбках, парамециях.

Актиномицеты (лучистые грибы) имеют сходное строение с микроскопическими грибами. Тело их представляет собой одну, очень разветвленную клетку (мицелий), которая состоит из цитоплазмы, недифференцированного ядра и оболочки. Толщина ветвящихся нитей мицелия – гиф – незначительна: от 0,2 до 1,2 мкм, длина может достигать нескольких десятков микрометров (рис. 46). На плотной питательной среде они образуют плотные колонии, врастающие в среду, которые сверху имеют конидиеносцы со спорами в виде мучнистого налета.

Учитывая особенности роста актиномицетов, мазки готовят следующим образом. Препаровальной иглой отделяют небольшой участок мицелия и помещают в каплю глицерина, затем покрывают его покровным стеклом и слегка прижимая, раздавливают мицелий. готовые препараты микроскопируют под малым и средним увеличением микроскопа с прикрытой диафрагмой.

Рис. 46. Морфология актиномицетов: 1 - мицелий; 2 - спорангии

Из патологического материала готовят обычным способом мазки, окрашивают простым методом и по Граму. Микроскопируют иммерсионным объективом.

Патогенные актиномицеты вызывают у животных и у человека болезнь, которая называется актиномикоз.

В организме больных животных актиномицеты образуют друзы – мелкие желтовато-белого цвета зерна (рис. 47).

Друзы извлекают из гноя петлей и помещают в каплю глицерина на предметное стекло, слегка придавливают покровным стеклом и вводят каплю раствора метиленовой сини. Микроскопию проводят объективами х8 и х40.

В центре друзы обнаруживают густое сплетение укороченных нитей с лучеобразно отходящими гифами, колбовидно утолщенными на концах. Окрашиваются актиномицеты метиленовой синью в бледно-голубой цвет, элементы гноя – в интенсивно синий цвет.

Рис. 47. Друзы Actinomyces bovis

Задания для самостоятельной работы

1. Приготовить препараты «раздавленная» капля для микроскопии из культур грибов, дрожжей и актиномицетов.

2. Провести микроскопию и изучить морфологические особенности грибов, дрожжей и актиномицетов. Зарисовать микрокартину.

Вопросы для самоподготовки и контроля знаний

1. Морфологические особенности микроскопических грибов. Перечислить основные отличительные признаки различных родов грибов.

2. Объяснить значение терминов: гифы, мицелий, плодоносящие гифы, спорангиеносец, конидии, споры, оидии, хламидоспоры.

3. Как происходит размножение грибов, дрожжей, дрожжеподобных грибов и актиномицетов.

4. Морфологические особенности дрожжей и дрожжеподобных грибов. Чем они отличаются между собой и от бактерий?

5. Морфологические особенности актиномицетов.

Тема 16. Методы изучения риккетсий (16.1), хламидий (16.2) и микоплазм (16.3)

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить и освоить методы изучения риккетсий, хламидий и микоплазм.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Демонстрационные препараты для микроскопии риккетсий, хламидий и микоплазм. Культура микоплазм на специальных плотных и жидких питательных средах (демонстрация). Микроскопы, схемы, таблицы, рисунки.

16.1. Методы изучения риккетсий

Риккетсии – группа микроорганизмов, особенностью которых является облигатный паразитизм. Они могут вызывать различные болезни животных и человека, лихорадку Ку, гидроперикардит, риккетсиозный моноцитоз собак, риккетсиоз жвачных и всеядных.

При проведении лабораторной диагностики из патологического материала готовят мазки-отпечатки и окрашивают их по Романовскому-Гимзе, по Граму.

При микроскопии видны мелкие полиморфные клетки: диаметр кокковидных форм около 0,5 мкм, размеры палочек 1-1,5x3-4 мкм; нитевидные формы имеют длину 10-40 мкм. Риккетсии не образуют спор и капсул, неподвижны, грамотрицательны (рис. 48).

Риккетсии не растут на искусственных питательных средах, для их культивирования используют куриные эмбрионы, культуры клеток млекопитающих, заражают белых мышей.

При диагностике риккетсиозов широко используют серологические реакции.

Рис. 48. Морфология риккетсий. Увеличение х1000

16.2. Методы изучения хламидий

Хламидии относятся также к облигатным паразитам. Они могут вызывать различные болезни животных и человека – орнитоз (пситтакоз), хламидиозы рогатого скота и других видов сельскохозяйственных животных.

Лабораторная диагностика сводится к микроскопии исследуемого материала, выделению из него хламидий и проведению серологических реакций.

Хламидии имеют очень малые размеры (0,2-1,3 мкм), полиморфны – палочковидные или сферические. Размножаются делением, процессу деления предшествует образование вокруг частицы хламидий капсулы, напоминающей бактериальную. Хламидии не образуют спор, неподвижны, грамот-рицательны.

Хорошо окрашиваются по Романовскому-Гимзе (рис. 49).

Рис. 49. Морфология хламидий. Увеличение х10000

Хламидии не растут на искусственных средах, для их культивирования используют куриные эмбрионы, культуры клеток и белых мышей.

16.3. Методы изучения микоплазм

Микоплазмы вызывают у крупного рогатого скота перипневманию, у коз инфекционную агалактию, у птиц респираторный микоплазмоз.

При лабораторной диагностике микоплазмов проводят микроскопию исследуемого материала, выделение из него микоплазм на питательных средах и заражение животных.

При микроскопии препаратов, окрашенных по Романовскому-Гимзе, по Граму, устанавливают полиморфные микроорганизмы шаровидной или палочковидной формы, которые имеют очень малые размеры – от 0,2 до 1,3 мкм.

Микоплазмы не образуют спор и капсул, неподвижны, грамот-рицательны.

Отличительной особенностью является отсутствие клеточной оболочки, благодаря чему они не имеют постоянной формы, проходят через бактериальные фильтры и не чувствительны к пенициллину. Размножаются делением, относятся к факультативным анаэробам и весьма требовательны к питательным средам – растут на средах с добавлением к ним стиролов и фосфолипидов (рис. 50).

Рис. 50. Морфология микоилазм. Увеличение х10 000

Задания для самостоятельной работы

1. Провести микроскопию демонстрационных препаратов возбудителя лихорадки Ку в инфицированных клетках желточного мешка куриных эмбрионов, окрашенных по Здрадовскому и Романовскому-Гимзе.

2. Провести микроскопию демонстрационных препаратов возбудителя хламидиозов, окрашенных по Романовскому-Гимзе.

3. Провести микроскопию демонстрационных препаратов, приготовленных из культуры микоплазм, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Изучить культуральные свойства микоплазм на специальных плотных и жидких средах.

Вопросы для самоподготовки и контроля знаний

1. Какие болезни вызывают риккетсии, хламидии и микоплазмы?

2. Биологические особенности этих микроорганизмов.

3. Как осуществляется лабораторная диагностика риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов?