ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 24.04.2024
Просмотров: 1123
Скачиваний: 2
СОДЕРЖАНИЕ
Министерство сельского хозяйства
Бактериологическая диагностика
1.2. Техника безопасности при работе в ветеринарной лаборатории
1.3. Общая схема проведения бактериологической диагностики
1.4. Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала
Сопроводительное письмо на патологический материал
Задания для самостоятельной работы
2.1. Устройство оптического микроскопа.
2.2. Виды микроскопии и их назначение
3.1. Техника приготовления препаратов для микроскопии
3.2. Бактериологические краски
3.3. Простой метод окрашивания препарата для микроскопии
Задания для самостоятельной работы
Вопросы для самоподготовки и контроля знаний
Тема 4. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий (4.1). Окраска по Граму (4.2)
4.1. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий
Задания для самостоятельной работы
Тема 5. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий: окраска спор (5.1) и капсул (5.2)
Тема 6. Назначение и классификация питательных сред для бактерий (6.1) и их приготовление (6.2)
6.1. Назначение и классификация питательных сред
Классификация питательных сред
6. 2. Приготовление питательных сред
Тема 7. Стерилизация. Методы: физические (7.1), химические (7.2), механические (7.3)
8.1. Техника посевов бактерий на питательные среды
8.2. Методы культивирования бактерий
8.3. Методы выделения чистых культур бактерий
Тема 9. Культуральные свойства бактерий на плотных (9.1) и в жидких (9.2) питательных средах
9.1. Культуральные свойства бактерий на плотных питательных средах
9.2. Культуральные свойства бактерий в жидких питательных средах
Тема 10. Ферментативные (биохимические) свойства бактерий
1. Определение ферментации углеводов
2. Определение протеолитических свойств
3. Определение редуцирующей (восстанавливающей) способности
11.1. Методы серийных разведений
Критерии оценки чувствительности стафилококков к пенициллину
11.2. Метод диффузии в агар (метод бумажных дисков)
Тема 12. Исследование бактерий на подвижность
В. Биологические методы исследований
13.1. Методы заражения лабораторных животных
13.2. Определение вирулентности микробов
13.3. Бактериологическое исследование трупа
Тема 14. Культивирование анаэробных микроорганизмов
Тема 15. Методы изучения микроскопических грибов и ак-тиномицетов
Тема 16. Методы изучения риккетсий (16.1), хламидий (16.2) и микоплазм (16.3)
16.1. Методы изучения риккетсий
16.2. Методы изучения хламидий
16.3. Методы изучения микоплазм
Раздел II. Основы санитарной микробиологии
Тема 17. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха (17.1) и почвы (17.2)
17.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы
Санитарно-бактериологические показатели почвы
Тема 18. Санитарно-микробиологическое исследование воды
19.1. Методы количественного определения микробов в исследуемых объектах
19.2. Санитарно-микробиологическое исследование мяса
Тема 20. Санитарно-микробиологическое исследование молока (20.1) и кисломолочных продуктов (20.2)
Классификация молока по редуктазе
Показатели бактериальной чистоты питьевого молока
20.2. Санитарно-микробиологическое исследование кисломолочных продуктов
Раздел III. Серологическая диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных
21.1. Реакция кольцепреципитации
21.2. Реакция диск-преципитации
21.3. Реакция диффузионной преципитации (рдп)
22.1. Постановка реакции агглютинации классическим (пробирочным) методом
22.2. Другие модификации постановки реакции. Кольцевая реакция с молоком (кр)
Тема 23. Реакция связывания комплемента (рск)
Задания для самостоятельной работы (для трех занятий)
Тема 24. Методы люминесцентной микроскопии
Тема 25. Иммуноферментный метод (ифм) диагностики инфекционных болезней
Тема 26. Использование в микробиологии полимеразной цепной реакции (пцр)
Тема 27. Использование в микробиологии днк-зондов
Раздел IV. Специальная (частная) микробиология
Тема 28. Патогенные стафилококки.
Тема 29. Патогенные стрептококки
Тема 30. Возбудители эшерихиозов
Тема 31. Возбудители сальмонеллезов
Тема 32. Возбудитель листериоза
Тема 33. Возбудитель рожи свиней
Тема 34. Возбудитель антропозоонозной чумы
Тема 35. Возбудители гемофилезов
Тема 36. Возбудитель пастереллеза
Тема 37. Возбудитель туляремии
Тема 38. Возбудитель бруцеллеза
Тема 39. Возбудитель сибирской язвы
40.1. Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкара)
40.2. Возбудители злокачественного отека
40.3. Возбудитель брадзота овец
40.4. Возбудитель инфекционной анаэробной энтеротоксемии
41.3. Возбудитель некробактериоза (фузобактериоза)
41.4. Возбудитель копытной гнили
Тема 42. Возбудители туберкулеза (42.1) и паратуберкулеза (42.2)
42.2. Возбудитель паратуберкулеза
Тема 43. Возбудитель актиномикоза
Тема 45. Возбудитель лептоспироза
Тема 46. Возбудитель кампилобактериоза (вибриоза)
Тема 47. Возбудитель дизентерии свиней
Тема 48. Возбудители микоплазмозов
Тема 49. Возбудители риккетсиозов
Тема 50. Возбудители хламидиозов
Тема 52. Возбудители микотоксикозов
Задания для програмированного контроля знаний студентов по частной ветеринарной микробиологии
Ответы на задания для программированного контроля по разделу «Частная микробиология»
2. Определение протеолитических свойств
Наиболее часто для обнаружения протеолитических ферментов производят посев чистой культуры бактерий уколом в столбик мясо-пептонного желатина. Посевы выдерживают при комнатной температуре (20-22 °С) в течение нескольких дней, при этом регистрируют не только наличие разжижения, но и его характер.
Рис. 30. Проявление роста (А) и характер разжижения (Б) мясо-пептонного желатина различными бактериями: протеолитический фермент отсутствует: 1 – аэроб; 2 – анаэроб; 3 – факультативный анаэроб; протеолитический фермент в незначительном количестве: 4 – факультативный анаэроб; 5 – анаэроб; 6 – аэроб
Разжижение может быть послойное, что характерно для синегнойных бактерий, стафилококки – в виде «чулка». Характер разжижения желатина возбудителем сибирской язвы напоминает перевернутую елочку (рис. 30).
Протеолитическое действие микроорганизмов можно наблюдать при посевах на свернутую сыворотку крови, вокруг колоний появляются углубления и зоны разжижения.
В молоке наблюдается просветление или растворение образовавшегося вначале сгустка казеина, который расщепляется с образованием пептона, что придает молоку желтоватый цвет (пептонизация молока).
Показателями более глубокого расщепления белка являются его конечные продукты: индол, аммиак, сероводород и др. Для определения этих газообразных веществ производят посев чистой культуры бактерий в бульон или пептонную воду. В пробирки с засеянной средой между стенкой пробирки и пробкой помещают индикаторную бумагу (рис. 31). Посевы выращивают в термостате в течение 1 – 3 суток.
а) обнаружение индола производится несколькими методами. Наиболее прост и доступен способ Мореля. Узкие полоски фильтровальной бумаги смачивают горячим насыщенным раствором щавелевой кислоты (индикаторная бумага) и высушивают. При выделении индола на 1-3-й день нижняя часть полоски бумаги вследствие соединения индола с щавелевой кислотой приобретает розовый цвет.
б) обнаружение аммиака определяют по посинению розовой лакмусовой бумаги, помещенной в пробирку таким же образом, как и для определения индола.
Рис. 31. Определение протеолитических свойств бактерий: изменение цвета индикаторной бумаги при образовании сероводорода, аммиака, индола – до посева (А), положительная реакция (Б)
в) обнаружение сероводорода. В пробирку с посевом помещают индикаторную полоску фильтровальной бумаги, смоченную раствором уксуснокислого свинца. При взаимодействии сероводорода и уксуснокислого свинца бумага чернеет за счет образования сернистого свинца.
3. Определение редуцирующей (восстанавливающей) способности
Для этой цели используют метиленовую синь, тионин, лакмус, нейтральный красный и др. К МПА и МПБ прибавляют раствор одного из указанных красителей. При наличии у бактерий редуцирующей способности среда обесцвечивается. Наиболее широкое применение имеет среда Ротбергера (МПА с 1% глюкозы и несколькими каплями насыщенного раствора нейтрального красного). При положительной реакции красный цвет среды переходит в желтый.
4 Определение фермента каталазы
Каталаза разлагает перекись водорода на воду и молекулярный кислород. Для обнаружения каталазы на поверхность 24-часовой культуры на скошенном МПА наливают 1-2 мл 1%-ного раствора перекиси водорода. Появление пузырьков газа при наклонном положении пробирки регистрируется как положительная реакция. В качестве контроля следует параллельно исследовать культуру, заведомо содержащую каталазу.
5. Определение плазмокоагуляции
Является одной из наиболее надежных проб для выявления пато-генности стафилококков. Для ее постановки разливают по 1-2 мл стерильной плазмы, вносят бактериологической петлей культуру бактерии и помещают в термостат. Проверяют результаты через 30 мин, 2, 4 часа и на другой день. При положительной реакции происходит коагуляция (свертывание плазмы).
6. Определение ДНК-азы
К расплавленному МПА добавляют навеску ДНК из расчета 2 мг на 1 мл среды. Посевы проводят в виде полоски и помещают в термостат на 18-24 часа. На выросший стафилококк наливают 5-6 мл н. НСl. Присутствие в культуре фермента, расщепляющего ДНК, выявляется образованием прозрачных зон вокруг колоний стафилококка.
7. Определение гемолитической способности.
Исследуемую культуру засевают на поверхность кровяного МПА. Для приготовления этой среды к 2%-ному расплавленному и охлажденному до 45°С МПА вносят 5% дефибринированной крови лошади, барана или кролика.
Культивирование проводится при 37°С в течение 24 – 48 часов.
Вокруг колоний микробов, вырабатывающих гемолизин, образуются зоны просветления вследствие растворения эритроцитов. Различают -гемолиз, когда колонии окружены зоной, окрашенной в зеленый цвет, и β-гемолиз при бесцветной зоне.
Задания для самостоятельной работы
1. Освоить методы определения биохимических свойств бактерий на демонстрационных микробных культурах. Определить каталазообразование у бактерий (на предметном стекле с агаровой культурой, в пробирке – с бульонной).
2. Продолжить выделение чистой культуры бактерий (3-й день исследования). Из колоний выделенных бактерий (кишечной палочки, стафилококка, вакцинного штамма сибиреязвенной палочки) приготовить мазки и окрасить их по Граму. Провести микроскопию. Из этой же колонии сделать пересев на МПА и МПБ.
3. Все полученные результаты внести в бланк экспертизы.
Вопросы для самоподготовки и контроля знаний
1. Культуральными свойствами бактерий называют:
А. Способность их ферментировать углеводы.
Б. Характер роста их на питательных средах.
В. Вызывать гибель лабораторных животных.
2. При выращивании бактерий на питательной среде с добавлением 10 % крови вокруг колоний образовались прозрачные зоны. Какими ферментативными свойствами обладает данный вид бактерий?
А. Сахаролитические.
Б. Протеолитические.
В. Гемолитические.
Г. Восстанавливающие.
3. В какую из нижеперечисленных питательных сред засевают микробную культуру для выявления сахаролитических свойств?
А. Кровяной МПА.
Б. Свернутая кровяная сыворотка.
В. Молоко.
Г. На среды Гисса (цветной ряд).
4. Как определить выделение сероводорода, образовавшегося при выращивании бактерий, обладающих протеолитическими ферментами?
А. По запаху.
Б. Полоской индикаторной бумаги, пропитанной раствором щавелевой кислоты.
В. Полоской индикаторной бумаги, пропитанной раствором уксуснокислого свинца.
Г. Полоской розовой лакмусовой бумаги.
5. В какую из перечисленных питательных сред высевают микробную культуру для выявления протеолитических ферментов?
А. Кровяной мясо-пептонный агар.
Б. МПЖ.
В. Молоко.
Д. На среды Гисса (цветной ряд).
6. Как определить наличие аммиака, образующегося при выращивании бактерий, обладающих протеолитическими ферментами?
А. По запаху.
Б. Полоской индикаторной бумаги, пропитанной раствором уксуснокислого свинца.
В. Полоской индикаторной бумаги, пропитанной раствором щавелевой кислоты.
Г. Полоской розовой лакмусовой бумаги.
Тема 11. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам. Методы: серийных разведений (11.1), диффузии в агар (11.2)
ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Овладеть методами определения чувствительности и устойчивости бактерий к антибиотикам.
МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Выделенные на предыдущем занятии чистые культуры бактерий, взвесь кала на физиологическом растворе. Для демонстрации: набор антибиотиков, ряд пробирок с МПБ, содержащим серийно разведенный пенициллин и засеянный культурой стафилококка. Стерильные чашки Петри, расплавленный МПА (столбиком), мерные и пастеровские пипетки, пинцеты, спиртовки, стандартные диски с разными антибиотиками. Таблицы, схемы, рисунки.
Антибиотики – это лекарственные препараты, обладающие антимикробным действием. Они получили широкое применение для терапии многих болезней животных и человека. С каждым годом расширяется арсенал антибиотических препаратов, выпускаемых промышленностью. Источником получения антибиотиков являются микроскопические грибы (пенициллин), актиномицеты (стрептомицин, тетрациклин), бактерии (грамицидин, полимиксин). Антибиотические вещества извлекают и из клеток растений (фитонциды лука, чеснока) и животных тканей (лизоцим, экмолин).
Механизм антагонистического действия антибиотиков сводится к нарушению процессов обмена веществ в микробной клетке.
Антибиотики могут оказывать на микроорганизмы бактериостатическое и бактерицидное действия. При бактериостатическом действии антибиотиков подавляет или задерживает рост микроорганизмов, а бактерицидное — вызывает их гибель.
Создание большого количества разнообразных антибиотиков вызвано, с одной стороны, поисками все более эффективных лечебных средств, а с другой, тем, что по мере широкого применения антибиотиков их лечебный эффект снижается вследствие возникновения резистентных (устойчивых) форм микробов.
Эффективность применения антибиотиков во многом зависит от чувствительности возбудителя болезни к применяемому антибиотику, поэтому возникла необходимость определения чувствительности микроорганизмов к этим препаратам.
При определении чувствительности желательно иметь чистые культуры возбудителя, и лишь при необходимости срочного получения ответа используют исследоуемый материал, содержащий всю микрофлору.