Файл: Practicum_po_microbiologii.doc

Рис. 14. Аппаратура для мерного разлива питательных сред

Рис. 15. Схема лабораторного рН-метра ЛПУ-01 и его электронной системы: 1 – полый шарик из электродного стекла; 2 – стеклянный электрод; 3 – внутренний контактный электрод; 4 – вспомогательный электрод; 5 – электролитический контакт; 6 – пористая перегородка; 7 – контролируемый раствор; 8 – раствор, заполняющий внутреннюю полость электрода; 9 – раствор КСl; 10 – показывающий прибор; 11 – светофильтр контрольной лампы; 12 – тумблер; 13 – переключатель вида работ; 14 – переключатель пределов измерения; 15 — переменное сопротивление настройки крутизны; 16 – переменное сопротивление настройки по буферному раствору; 17 – переменное сопротивление ручной температурной компенсации; 18 — клемма заземления датчика; 19 – винт фиксации узла ручного температурного компенсатора

Вопросы для самоподготовки и контроля знаний

1. Какие компоненты используются при приготовлении МПБ?

А. Мясной экстракт, пептон, поваренная соль.

Б. Мясной экстракт, пептон, агар-агар.

В. Водопроводная вода, поваренная соль, пептон.

Г. Мясной экстракт, пептон, соль, сыворотка крови.

2. С какой целью при приготовлении МПА включают 2-3 % агар-агара?

А. Для повышения питательных свойств среды.

Б. Для создания плотной консистенции.

В. Для установления рН.

Г. Для создания изотоничности.

3. Установите, в качестве какого источника питания для бактерий служит пептон, входящий в состав многих питательных сред?

А. Углеродного.

Б. Азотистого.

В. Минерального.

4. Мясо-пептонный агар по консистенции относится к средам:

А. Жидким.

Б. Плотным.

5. К какой группе относятся питательные среды по применению?

А. Мясо-пептонный агар и мясо-пептонный бульон.

Б. МПБ и МПА с желчью, с сывороткой крови.

В. Среда Эндо, среда Гисса.

Г. МПА с 10 % поваренной соли для стафилококков.

1. Обычные питательные среды.

2. Дифференциально-диагностические.

3. Специальные.

4. Элективные.

6. С какой целью используют элективные питательные среды?

А. Для выделения определенной группы или вида бактерий.

Б. Для накопления бактерий.

В. Для дифференциации.

7. Какой рН питательных сред для выращивания многих патогенных бактерий является оптимальным?

А. 7,2 – 7,4.

Б. 6,4 – 6,6.

В. 7,8 – 8,0.

Тема 7. Стерилизация. Методы: физические (7.1), химические (7.2), механические (7.3)

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Ознакомить с методами стерилизации, применяемыми в микробиологической практике, их назначением; приборами и аппаратурой для проведения стерилизации. Научить основным принципам подготовки к стерилизации лабораторной посуды, питательных сред, инструментов и др.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. 1. Спиртовки, стерилизатор (кипятильник), сушильный шкаф, текучепаровой аппарат (Коха), автоклав, бактерицидные лампы (в сборе), свечи, асбестовые фильтры, аппарат Зейтца, 2. Чашки Петри, пипетки, бумага для завертывания, вата.

Стерилизацией называют процесс, направленный на полное уничтожение всех живых микроорганизмов в стерилизуемых объектах как в лабораториях, так и в промышленных условиях.

Большое разнообразие стерилизуемых объектов потребовало разработки различных методов стерилизации.

Главными требованиями в стерилизации являются ее надежность и сохранение качества стерилизуемых объектов.

Различают физический, химический и механический методы стерилизации. К физическим методам стерилизации относят действие высокой температуры, ультрафиолетовых лучей, ионизирующей радиации, ультразвука и др. Химические методы используют для обработки вакцин, сывороток и других объектов, консервируемых различными антисептиками. Механический метод – фильтрация жидкостей через бактериальные фильтры. С помощью этого метода механически очищают жидкость от бактерий. Фильтрующиеся формы бактерий, вирусы через такие фильтры проходят.

7.1. Физические методы

А. Термическая обработка

Имеется множество вариантов, но термическая обработка применима лишь в отношении термоустойчивых материалов и сред.

1. Стерилизация в пламени (фламбирование). Этот способ применяется для стерилизации бактериологических петель, игл, предметных и покровных стекол, пинцетов и других мелких металлических и стеклянных предметов.

2. Стерилизация кипячением используется в основном для обработки игл, шприцев, хирургических инструментов. Она проводится в специальных стерилизаторах (рис. 16) в течение 30 минут. Для повышения точки кипения и устранения жесткости воды добавляют 1 % соды. Этот метод не обеспечивает полной стерилизации, так как споры некоторых бацилл выдерживают кипячение в течение нескольких часов.

3. Стерилизация сухим жаром проводится в сухожаровых шкафах, рис. 17, (металлических двустенных шкафах, изолированных асбестом или линолеумом, с отверстием в верхней части для термометра). Электрические аппараты для стерилизации горячим воздухом разнообразны по форме, снабжены хорошей тепловой изоляцией.

Необходимая температура поддерживается автоматически при помощи терморегулятора, работу которого можно наблюдать с помощью контрольной лампы. Стерилизуют горячим воздухом при 160°С в течение 1,5 часа с момента достижения этой температуры.

Рис. 16. Стерилизатор-кипятильник

При 170°С бумага и вата желтеют, при более высоких температурах обугливаются. В сухожаровых шкафах стерилизуют лабораторную посуду: чашки Петри, вложенные в специальные металлические пеналы или обернутые в бумагу по одной или несколько штук в пачке, пастеровские и градуированные пипетки, закрытые с одного конца ватой, находящиеся в металлических пеналах или завернутые в бумагу по 10-15 штук. Пробирки и колбы закрывают ватными пробками.

4. Стерилизация паром является наиболее эффективным методом и осуществляется двумя способами: насыщенным паром под давлением и текучим паром.

а) Стерилизация паром под давлением производится в автоклаве (рис. 18, 19), который представляет собой толстостенный котел цилиндрической формы, покрытый снаружи кожухом, закрывающийся крышкой.

Рис. 17. Сушильные шкафы различной конструкции для стерилизации сухим нагретым воздухом.

Рабочая камера получает пар от парообразователя, помещенного под камерой и соединенного с ней патрубком. Вода в котел поступает через воронку, соединенную с указательной трубкой. Вода в котле нагревается электрическим током от сети. Крышка автоклава имеет внутри электронагревательный элемент с регулятором, посредством которого регулируется нагрев воды. Контроль за давлением производится с помощью манометра. Для автоматического выхода пара при превышении максимального рабочего давления предусмотрен предохранительный клапан. На шкале манометра обозначается только избыточное давление, нормальное же давление соответствует показанию «О». Работа с автоклавом требует строгого выполнения правил, предусмотренных специальной инструкцией, прилагаемой к каждому аппарату.

Инструкцией предусматривается:

1. Перед работой проверить исправность всех частей автоклава.

2. Через воронку налить воду в маленький котел и закрыть кран.

3. Загрузить стерилизационную камеру материалом, подлежащим стерилизации, закрыть крышку.

4. Включить нагревательную систему при открытых паровыпускающих кранах; с появлением пара будет выходить воздух, а затем пар с конденсатом. Кран закрывают, когда воздух из автоклава полностью вытеснен, о чем свидетельствует непрерывная струя пара. При наличии воздуха в автоклаве показания манометра не соответствует температуре.

5. По окончании стерилизации выключают электронагревательный элемент. После того как давление упадет до нуля, открывают спускной кран и приступают к разгрузке автоклава.

При давлении в 0,5 атм температура в автоклаве равна 110-112°С, в 1 атм – 120-121°, в 1,5 атм – 124-126°, в 2 атм – 132-133°С.

Рис. 18. Автоклав для стерилизации паром под давлением: общий вид

Рис. 19. Схема устройства автоклава: 1 – стерилизационная камера; 2 – электрощит; 3 – нагревательное приспособление; 4 – предохранительный клапан; 5 – переключатель; 6 – выключатель; 7 – сигнальная лампа; 8 – паровая камера; 9 – кожух; 10 – манометр; 11 — крышка; 12 – штурвал; 13 – выпускной кран; 14 – патрубок с вентилем; 15 – воронка; 16 — водомерное стекло; 17 — парообразователь: 18 – отверстие для прохода пара

Для контроля работы автоклава между стерилизуемыми предметами кладут стеклянную запаянную трубку с веществом, имеющим определенную точку плавления (бензонафтол – 110°, бензойная кислота – 120° и др.), и небольшим количеством анилинового красителя. Эффективность стерилизации можно также проверить, помещая в автоклав материал, заведомо зараженный спорами бацилл.

б) Стерилизация текучим паром производится в аппарате Коха, широко применяющемся в лабораторной практике. Аппарат Коха представляет собой металлический цилиндр, покрытый теплоизоляционным материалом. В конической крышке аппарата имеется отверстие для выхода пара. В нижней части расположены кран и водомерная трубка. Внутри имеется подставка для стерилизуемых материалов. На дно аппарата заливается вода, которая не должна касаться стерилизуемого материала. Стерилизуют при 100° в течение 30-60 мин с момента начала кипения воды, при этом вегетативные формы микробов погибают, а споры сохраняются, и при комнатной температуре через сутки прорастают. Повторное воздействие паром снова обезвреживает вегетативные формы. Третье прогревание убивает все остальные бациллы, развивающиеся из спор. Стерилизуют таким методом (дробно) питательные среды и другие материалы, изменяющие свои свойства при температуре выше 100°: молоко, желатину, картофельные среды и среды с углеводами.