ВУЗ: Не указан

Категория: Не указан

Дисциплина: Не указана

Добавлен: 24.04.2024

Просмотров: 1012

Скачиваний: 2

ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.

СОДЕРЖАНИЕ

Министерство сельского хозяйства

Раздел I. Общая микробиология

Бактериологическая диагностика

1.2. Техника безопасности при работе в ветеринарной лаборатории

1.3. Общая схема проведения бактериологической диагностики

1.4. Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала

Сопроводительное письмо на патологический материал

Задания для самостоятельной работы

2.1. Устройство оптического микроскопа.

2.2. Виды микроскопии и их назначение

Тема 3. Техника приготовления препаратов для микроскопии (3.1). Бактериологические краски (3.2). Простой метод окрашивания препаратов (3.3). Изучение основных форм бактерий (3.4)

3.1. Техника приготовления препаратов для микроскопии

3.2. Бактериологические краски

3.3. Простой метод окрашивания препарата для микроскопии

3.4. Основные формы бактерий

Задания для самостоятельной работы

Вопросы для самоподготовки и контроля знаний

Тема 4. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий (4.1). Окраска по Граму (4.2)

4.1. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий

4.2. Окрашивание по Граму

Задания для самостоятельной работы

Тема 5. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий: окраска спор (5.1) и капсул (5.2)

5.1. Окраска спор

5.2. Окраска капсул

Тема 6. Назначение и классификация питательных сред для бактерий (6.1) и их приготовление (6.2)

6.1. Назначение и классификация питательных сред

Классификация питательных сред

6. 2. Приготовление питательных сред

Тема 7. Стерилизация. Методы: физические (7.1), химические (7.2), механические (7.3)

7.1. Физические методы

7.2. Химические методы

7.3. Механические методы

Тема 8. Методы посева бактерий на питательные среды (8.1), их культивирование (8.2), выделение чистых культур бактерий (8.3)

8.1. Техника посевов бактерий на питательные среды

8.2. Методы культивирования бактерий

8.3. Методы выделения чистых культур бактерий

Тема 9. Культуральные свойства бактерий на плотных (9.1) и в жидких (9.2) питательных средах

9.1. Культуральные свойства бактерий на плотных питательных средах

9.2. Культуральные свойства бактерий в жидких питательных средах

Тема 10. Ферментативные (биохимические) свойства бактерий

1. Определение ферментации углеводов

2. Определение протеолитических свойств

3. Определение редуцирующей (восстанавливающей) способности

Тема 11. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам. Методы: серийных разведений (11.1), диффузии в агар (11.2)

11.1. Методы серийных разведений

Критерии оценки чувствительности стафилококков к пенициллину

11.2. Метод диффузии в агар (метод бумажных дисков)

Тема 12. Исследование бактерий на подвижность

В. Биологические методы исследований

Тема 13. Методы заражения лабораторных животных (13.1). Определение вирулентности микроорганизмов (13.2). Бактериологическое исследование трупа животного (13.3)

13.1. Методы заражения лабораторных животных

13.2. Определение вирулентности микробов

13.3. Бактериологическое исследование трупа

Тема 14. Культивирование анаэробных микроорганизмов

Тема 15. Методы изучения микроскопических грибов и ак-тиномицетов

Тема 16. Методы изучения риккетсий (16.1), хламидий (16.2) и микоплазм (16.3)

16.1. Методы изучения риккетсий

16.2. Методы изучения хламидий

16.3. Методы изучения микоплазм

Раздел II. Основы санитарной микробиологии

Тема 17. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха (17.1) и почвы (17.2)

17.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы

Санитарно-бактериологические показатели почвы

Тема 18. Санитарно-микробиологическое исследование воды

Тема 19. Подведение итогов санитарно-микробиологического исследования воздуха, почвы и воды (19.1). Санитарно-микробиологическое исследование мяса (19.2)

19.1. Методы количественного определения микробов в исследуемых объектах

19.2. Санитарно-микробиологическое исследование мяса

Тема 20. Санитарно-микробиологическое исследование молока (20.1) и кисломолочных продуктов (20.2)

Классификация молока по редуктазе

Показатели бактериальной чистоты питьевого молока

20.2. Санитарно-микробиологическое исследование кисломолочных продуктов

Раздел III. Серологическая диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных

Тема 21. Реакция преципитации: кольцепреципитации (21.1), диск-преципитации (21.2), диффузионной преципитации (21.3)

21.1. Реакция кольцепреципитации

21.2. Реакция диск-преципитации

21.3. Реакция диффузионной преципитации (рдп)

Тема 22. Реакция агглютинации: пробирочный метод (22.1). Другие модификации постановки реакции (22.2)

22.1. Постановка реакции агглютинации классическим (пробирочным) методом

22.2. Другие модификации постановки реакции. Кольцевая реакция с молоком (кр)

Тема 23. Реакция связывания комплемента (рск)

Главный опыт рск

Задания для самостоятельной работы (для трех занятий)

Тема 24. Методы люминесцентной микроскопии

Тема 25. Иммуноферментный метод (ифм) диагностики инфекционных болезней

Тема 26. Использование в микробиологии полимеразной цепной реакции (пцр)

Тема 27. Использование в микробиологии днк-зондов

Раздел IV. Специальная (частная) микробиология

Тема 28. Патогенные стафилококки.

Тема 29. Патогенные стрептококки

Тема 30. Возбудители эшерихиозов

Тема 31. Возбудители сальмонеллезов

Тема 32. Возбудитель листериоза

Тема 33. Возбудитель рожи свиней

Тема 34. Возбудитель антропозоонозной чумы

Тема 35. Возбудители гемофилезов

Тема 36. Возбудитель пастереллеза

Тема 37. Возбудитель туляремии

Тема 38. Возбудитель бруцеллеза

Тема 39. Возбудитель сибирской язвы

Тема 40. Патогенные анаэробы – возбудители эмфизематозного карбункула (40.1), злокачественного отека (40.2), брадзота овец (40.3), инфекционной анаэробной энтеротоксемии (40.4)

40.1. Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкара)

40.2. Возбудители злокачественного отека

40.3. Возбудитель брадзота овец

40.4. Возбудитель инфекционной анаэробной энтеротоксемии

Тема 41. Патогенные анаэробы – возбудители столбняка (41.1), ботулизма (41.2), некробактериоза (41.3), копытной гнили (41.4)

41.1. Возбудитель столбняка

41.2. Возбудитель ботулизма

41.3. Возбудитель некробактериоза (фузобактериоза)

41.4. Возбудитель копытной гнили

Тема 42. Возбудители туберкулеза (42.1) и паратуберкулеза (42.2)

42.1. Возбудитель туберкулеза

42.2. Возбудитель паратуберкулеза

Тема 43. Возбудитель актиномикоза

Тема 44. Возбудитель сапа

Тема 45. Возбудитель лептоспироза

Тема 46. Возбудитель кампилобактериоза (вибриоза)

Тема 47. Возбудитель дизентерии свиней

Тема 48. Возбудители микоплазмозов

Тема 49. Возбудители риккетсиозов

Тема 50. Возбудители хламидиозов

Тема 51. Возбудители микозов

Тема 52. Возбудители микотоксикозов

Задания для програмированного контроля знаний студентов по частной ветеринарной микробиологии

Ответы на задания для программированного контроля по разделу «Частная микробиология»

Оглавление

Тема 20. Санитарно-микробиологическое исследование молока (20.1) и кисломолочных продуктов (20.2)

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Дать общее представление о методах санитарно-микробиологического исследования молока и кисломолочных продуктов. Овладеть методами исследования и оценки их качества.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для проведения редуктазной пробы: пробы молока по 20 мл в пробирках, пипетки на 1 мл, рабочий раствор метиленовой сини, редуктазник. Для обнаружения ингибирующих веществ в молоке: пробы молока, пробирки, пипетки на 1 и 10 мл, рабочий раствор резазурина, культура термофильного стрептококка, водяная баня на 40°С.

Для определения общего микробного числа в молоке: пробы молока (сырого и пастеризованного), физиологический раствор в пробирках по 9 мл, стерильные пипетки на 1 мл, МПА (столбиком) в пробирках, чашки Петри.

Для изучения микрофлоры кисломолочных продуктов: готовые окрашенные препараты для микроскопии, приготовленные из сметаны, ацидофилина, кефира, кумыса.

Молоко может быть источником как инфекционных болезней, так и пищевых отравлений. Молоко, поступающее на молочный завод, подвергается строгому санитарно-микробиологическому контролю в соответствии с требованиями ГОСТа или другими нормативно-техническими документами.

При установлении сорта поступающего молока учитывают следующие санитарные показатели (табл. 6).

Таблица 6

Санитарные показатели для определения сорта молока

Показатели

Норма для молока сорта

первого

второго

несортового

Кислотность, °Т

16-18

16-18

Не более 21

Степень чистоты по эталону

I

II

III

Бактериальная обсемененность по редуктазной пробе

I

II

III

Температура, °С

Не более 10

Не более 10

Не более 10


Кислотность молока служит одним из основных показателей санитарного качества молока, по которому при приемке осуществляется определение сорта молока. Кислотность молока тесно связана с бактериальной обсемененностью. Свежее молоко имеет нейтральную реакцию и почти не содержит в своем составе молочной кислоты.

Кислотность обозначают в условных градусах Тернера (°Т). Под условными градусами понимают количество миллилитров 0,1 н. раствора натра (кали) едкого, необходимых для нейтрализации 100 мл молока, разбавленного вдвое дистиллированной водой при индикаторе фенолфталеине.

Показатель титруемой кислотности позволяет установить повышение кислотности в результате размножения молочнокислых бактерий, сбраживающих лактозу до молочной кислоты.

Показателем санитарных условий получения молока является степень чистоты молока, которая определяется следующим образом. Через специальный ватный фильтр пропускают 250 мл молока и сравнивают полученный осадок на фильтре с эталоном.

Молоко по степени загрязненности делят на группы:

1-я – на фильтре нет частиц механической примеси;

2-я – на фильтре отдельные частицы механической примеси;

3-я – на фильтре заметный осадок (волоски, частицы сена, песок и др.).

Проба на редуктазу является косвенным методом определения общей микробной обсемененности молока. Микроорганизмы, попавшие в молоко, в процессе жизнедеятельности выделяют анаэробные дегидразы, по старой классификации называемые редуктазами. Существует зависимость между общим количеством бактерий в молоке и содержанием в нем редуктаз, что позволяет использовать редуктазную пробу как косвенный показатель бактериальной обсемененности сырого молока. Фермент редуктаза обладает способностью восстанавливать метиленовую синь, которая при этом обесцвечивается.

В пробирки наливают 20 мл исследуемого молока и 1 мл рабочего раствора метиленовой сини, закрывают резиновой пробкой, смешивают путем трехкратного переворачивания пробирки (молоко окрашивается в синий цвет). Пробирки помещают в водяную баню при 38-40°С.

Наблюдение за изменением окраски ведут через 20 мин, через 2 ч, через 5 ч 30 мин после начала анализа. В чистом свежем молоке редуктазы содержится очень мало, поэтому оно обесцвечивается долго.

В зависимости от времени обесцвечивания метиленовой сини молоко относят к одному из четырех классов (табл. 7).


Таблица 7


Классификация молока по редуктазе

Классы

Оценка качества молока

Продолжительность обесцвечивания

Количество бактерий в 1 мл молока

1-й

Хорошее

Свыше 5 ч 30 мин

Менее 500 тыс.

2-й

Удовлетворительное

Свыше 2 ч

до 5 ч 30 мин

От 500 тыс.

до 4 млн.

3-й

Плохое

Свыше 20 мин

до 2 ч

От 4 млн.

до 20 млн.

4-й

Очень плохое

20 мин и менее

20 млн. и больше

Оценка качества молока осуществляется по худшему показателю. Так, если по редуктазной пробе молоко относится к первому классу, по степени чистоты – к первой группе, а кислотность повышена, например до 20ºТ, то молоко относится ко второму сорту.

Молочные предприятия не принимают молоко с нейтрализующими, консервирующими веществами, содержащие антибиотики и другие ингибирующие вещества. Эти вещества задерживают или подавляют (ингибируют) развитие молочнокислых микроорганизмов, используемых для выработки кисломолочных продуктов.

Для определения в молоке формалина, перекиси водорода, антибиотиков предложена резазуриновая проба. Сущность метода заключается в том, что микроорганизмы Str. thermophilus , чувствительные к ингибирующим веществам, развиваясь, выделяют вещества, восстанавливающие резазурин. Для этого к 10 мл молока добавляют 1 мл рабочего раствора резазурина и 3-4 капли термофильного стрептококка (Str. thermophilus), чувствительного к антибиотикам. Содержимое пробирок перемешивают, при этом молоко окрашивается в фиолетовый цвет, ставят в водяную баню при 40°С на 45 мин.


Сделать заключение о качестве молока по следующим изменениям:

- сине-стальной или фиолетовый цвет исследуемого молока в пробирке указывает на наличие антибиотиков (ингибирующих веществ) в молоке (т.е. наблюдается ингибирование размножения молочнокислого стрептококка);

- белый или розовый цвет исследуемого молока свидетельствует о том, что в молоке нет антибиотиков и молочнокислый стрептококк беспрепятственно размножается.

В торговую сеть молоко поступает в пастеризованном виде. Цель пастеризации молока – продлить срок хранения молока, уничтожить вегетативные формы бактерий. Режимы пастеризации, принятые в молочной промышленности, обеспечивают полное уничтожение возбудителей туберкулеза, бруцеллеза, кишечной палочки и других условнопатогенных микроорганизмов.

Существует несколько режимов пастеризации молока:

а) длительная – 63 °С в течение 30 мин;

б) кратковременная – 74-78 °С в течение 20-30 с;

в) моментальная – 85-90 °С без выдержки.

После пастеризации молока и сливок необходимо их охладить до +4 °С, что препятствует прорастанию спор и развитию оставшейся микрофлоры.

Микробиологический контроль эффективности пастеризации проводят в соответствии с действующей инструкцией, при этом определяют:

1) общее микробное число (ОМЧ);

2) коли-титр и бродильный титр.

Общее микробное число (ОМЧ) определяют в 1 мл исследуемого молока. Для этого готовят разведения сырого и пастеризованного молока на стерильной воде по схеме (рис. 55).

По 1 мл каждого разведения: вносят в стерильные чашки Петри и заливают расплавленным и охлажденным до 45 °С питательным агаром. Содержимое чашек тщательно перемешивают путем легкого вращательного покачивания и после застывания среды их помещают в термостат при 37 °С на 48 ч. После этого подсчитывают количество выросших колоний в каждой чашке. При этом для подсчета берут те чашки, количество колоний в которых не менее 50 и не более 300.

Число колоний, выросших в каждой чашке, пересчитывают на 1 мл, или 1 г, продукта с учетом разведения.

В соответствии с действующим стандартом питьевое молоко должно отвечать требованиям, приведенным в табл. 8.

Таблица 8