ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 24.04.2024
Просмотров: 996
Скачиваний: 2
СОДЕРЖАНИЕ
Министерство сельского хозяйства
Бактериологическая диагностика
1.2. Техника безопасности при работе в ветеринарной лаборатории
1.3. Общая схема проведения бактериологической диагностики
1.4. Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала
Сопроводительное письмо на патологический материал
Задания для самостоятельной работы
2.1. Устройство оптического микроскопа.
2.2. Виды микроскопии и их назначение
3.1. Техника приготовления препаратов для микроскопии
3.2. Бактериологические краски
3.3. Простой метод окрашивания препарата для микроскопии
Задания для самостоятельной работы
Вопросы для самоподготовки и контроля знаний
Тема 4. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий (4.1). Окраска по Граму (4.2)
4.1. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий
Задания для самостоятельной работы
Тема 5. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий: окраска спор (5.1) и капсул (5.2)
Тема 6. Назначение и классификация питательных сред для бактерий (6.1) и их приготовление (6.2)
6.1. Назначение и классификация питательных сред
Классификация питательных сред
6. 2. Приготовление питательных сред
Тема 7. Стерилизация. Методы: физические (7.1), химические (7.2), механические (7.3)
8.1. Техника посевов бактерий на питательные среды
8.2. Методы культивирования бактерий
8.3. Методы выделения чистых культур бактерий
Тема 9. Культуральные свойства бактерий на плотных (9.1) и в жидких (9.2) питательных средах
9.1. Культуральные свойства бактерий на плотных питательных средах
9.2. Культуральные свойства бактерий в жидких питательных средах
Тема 10. Ферментативные (биохимические) свойства бактерий
1. Определение ферментации углеводов
2. Определение протеолитических свойств
3. Определение редуцирующей (восстанавливающей) способности
11.1. Методы серийных разведений
Критерии оценки чувствительности стафилококков к пенициллину
11.2. Метод диффузии в агар (метод бумажных дисков)
Тема 12. Исследование бактерий на подвижность
В. Биологические методы исследований
13.1. Методы заражения лабораторных животных
13.2. Определение вирулентности микробов
13.3. Бактериологическое исследование трупа
Тема 14. Культивирование анаэробных микроорганизмов
Тема 15. Методы изучения микроскопических грибов и ак-тиномицетов
Тема 16. Методы изучения риккетсий (16.1), хламидий (16.2) и микоплазм (16.3)
16.1. Методы изучения риккетсий
16.2. Методы изучения хламидий
16.3. Методы изучения микоплазм
Раздел II. Основы санитарной микробиологии
Тема 17. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха (17.1) и почвы (17.2)
17.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы
Санитарно-бактериологические показатели почвы
Тема 18. Санитарно-микробиологическое исследование воды
19.1. Методы количественного определения микробов в исследуемых объектах
19.2. Санитарно-микробиологическое исследование мяса
Тема 20. Санитарно-микробиологическое исследование молока (20.1) и кисломолочных продуктов (20.2)
Классификация молока по редуктазе
Показатели бактериальной чистоты питьевого молока
20.2. Санитарно-микробиологическое исследование кисломолочных продуктов
Раздел III. Серологическая диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных
21.1. Реакция кольцепреципитации
21.2. Реакция диск-преципитации
21.3. Реакция диффузионной преципитации (рдп)
22.1. Постановка реакции агглютинации классическим (пробирочным) методом
22.2. Другие модификации постановки реакции. Кольцевая реакция с молоком (кр)
Тема 23. Реакция связывания комплемента (рск)
Задания для самостоятельной работы (для трех занятий)
Тема 24. Методы люминесцентной микроскопии
Тема 25. Иммуноферментный метод (ифм) диагностики инфекционных болезней
Тема 26. Использование в микробиологии полимеразной цепной реакции (пцр)
Тема 27. Использование в микробиологии днк-зондов
Раздел IV. Специальная (частная) микробиология
Тема 28. Патогенные стафилококки.
Тема 29. Патогенные стрептококки
Тема 30. Возбудители эшерихиозов
Тема 31. Возбудители сальмонеллезов
Тема 32. Возбудитель листериоза
Тема 33. Возбудитель рожи свиней
Тема 34. Возбудитель антропозоонозной чумы
Тема 35. Возбудители гемофилезов
Тема 36. Возбудитель пастереллеза
Тема 37. Возбудитель туляремии
Тема 38. Возбудитель бруцеллеза
Тема 39. Возбудитель сибирской язвы
40.1. Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкара)
40.2. Возбудители злокачественного отека
40.3. Возбудитель брадзота овец
40.4. Возбудитель инфекционной анаэробной энтеротоксемии
41.3. Возбудитель некробактериоза (фузобактериоза)
41.4. Возбудитель копытной гнили
Тема 42. Возбудители туберкулеза (42.1) и паратуберкулеза (42.2)
42.2. Возбудитель паратуберкулеза
Тема 43. Возбудитель актиномикоза
Тема 45. Возбудитель лептоспироза
Тема 46. Возбудитель кампилобактериоза (вибриоза)
Тема 47. Возбудитель дизентерии свиней
Тема 48. Возбудители микоплазмозов
Тема 49. Возбудители риккетсиозов
Тема 50. Возбудители хламидиозов
Тема 52. Возбудители микотоксикозов
Задания для програмированного контроля знаний студентов по частной ветеринарной микробиологии
Ответы на задания для программированного контроля по разделу «Частная микробиология»
17.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы
Почва является естественной средой обитания микроорганизмов. В ней имеются все условия для благоприятного их развития (достаточное количество влаги, органических и минеральных веществ). Из природных субстратов почва обильно заселена микроорганизмами, которые составляют ее постоянную микрофлору. Санитарно-гигиеническая роль этой микрофлоры огромна. Почвенные микроорганизмы участвуют в минерализации органических отбросов, самоочищении почвы, в круговороте веществ в природе.
В почву могут попадать патогенные микроорганизмы со сточными водами, с трупами людей и животных. В связи с этим почва может служить источником распространения возбудителей инфекционных болезней, через почву загрязняются объекты окружающей среды, может происходить обсеменение сапрофитными и болезнетворными микроорганизмами сырья, пищевых продуктов, кормов.
Количественный и видовой состав микроорганизмов в почве обусловлен содержанием в ней органических веществ, влаги, рН, температурой, климатическими условиями и т.д.
В составе микрофлоры почвы принято выделять так называемые физиологические группы микроорганизмов, которые участвуют в различных процессах и на разных этапах постепенного разложения органических веществ, к которым относятся:
1. Аммонофикаторы (гнилостные).
2. Нитрифицирующие бактерии.
3. Азотофиксирующие.
4. Бактерии, расщепляющие клетчатку, а также вызывающие различные брожения (молочнокислое, спиртовое, маслянокислое и др.)
5. Бактерии, участвующие в круговороте серы, железа, фосфора других элементов.
В почве могут быть и патогенные бактерии, продолжительность их выживаемости зависит от вида и условий внешней среды.
Неспорообразующие патогенные бактерии и вирусы погибают в ней в течение нескольких суток или месяцев, в частности, возбудитель туберкулеза в почве сохраняется до 1 года.
Особое место занимают возбудители почвенных инфекций (сибирской язвы, эмфизематозного карбункула, столбняка, ботулизма), которые образуют споры и сохраняются в почве годами, а возбудитель сибирской язвы – десятки лет.
Краткий санитарно-бактериологический анализ почвы включает определение двух показателей: общего количества микробов (в 1 г почвы) и коли-титра.
В отдельных случаях в почве определяют возбудителей сибирской язвы, столбняка, ботулизма.
Отбор проб почвы. На обследуемой территории до 1000 м выделяют два участка по 25 м2 каждый: один участок выбирают вблизи, другой – вдали от источника загрязнения. С каждого участка отбирают среднюю пробу, составленную из 5 образцов, взятых по диагонали или в четырех точках по краям и в одной в центре. Образцы берут на глубине до 20 см, при исследовании почвы скотомогильников – ниже глубины захоронения не менее чем на 25 см, Пробы отбирают стерильной железной лопаткой, совком или специальным буром в стерильные широкогорлые банки, которые закрывают ватными пробками. К банке приклеивают этикетку с датой и номером отобранной почвы.
Масса каждого образца должна быть 200-300 г, а смешанного – не менее 1 кг. Отобранные пробы почвы направляют в лабораторию и исследуют сразу же или не позднее чем через 12-18 ч при хранении при 1-5 °С.
В колбу на 500 мл, наливают 270 мл стерильной водопроводной воды и вносят 30 г исследуемой почвы. Колбу с содержимым встряхивают в течение 10 мин. Из полученного разведения почвы 1:10-1 готовят десятикратные разведения: для чистых почв 1:10-2 до 1:10-4, для загрязненных – до 1:10-6 и больше.
Определение общего микробного числа (ОМЧ)
Из последних 3-4 пробирок приготовленных разведений берут 1 мл и переносят в стерильные чашки Петри (не менее двух чашек на каждое разведение). В эти чашки заливают по 10 мл расплавленного и охлажденного до 45°С МПА и тщательно перемешивают. Посевы культивируют в термостате при 37°С 24-48 ч.
Учет результатов проводят путем подсчета выросших колоний и определения среднеарифметического числа. Полученное число колоний умножают на степень разведения исследуемой почвы, получая число бактерий в 1 г почвы.
Определение коли-титра почвы методом бродильных проб с использованием среды Кесслера. Исследования проводят в три этапа. На первом этапе готовят разведения: для чистых почв от 1:10-1 до 1:10-3: для загрязненных – от 1:10-3 до 1:10-6 . После тщательного перемешивания 1 мл полученной суспензии из различных разведений переносят в пробирку с 9 мл среды Кесслера (на 1 л дистиллированной воды 10 г пептона, 50 мл бычьей желчи, 2,5 г лактозы, 4 мл 1%-ного водного раствора генцианвиолета). Посевы культивируют при 43°С в течение 48 часов.
На втором этапе исследования просматривают посевы на среде Кесслера. Из пробирок с наличием газа продолжают высев на среду Эндо. Посевы культивируют при 37°С в течение 24 ч.
На третьем этапе исследуют колонии, выросшие на среде Эндо. Отбирают колонии, типичные для бактерий группы кишечных палочек, готовят из них мазки, красят по Граму, микроскопируют. При обнаружении в мазках коротких полиморфных грамотрицательных палочек производят высев из этих колоний на среду Кесслера для подтверждения газообразования в чистой культуре.
Таблица 3
Санитарно-бактериологические показатели почвы
Оценка почвы |
Общее количество бактерий в 1 г почвы |
Коли-титр |
Относительно чистая Умеренно загрязненная Сильно загрязненная |
Менее 10 тыс. Сотни тысяч Миллионы |
Выше 1,0 1-0,01 0,01-0,001 |
Задание для самостоятельной работы
1. Провести исследование воздуха в различных помещениях кафедры на общую бактериальную загрязненность методами седиментации (по Коху) и с использованием аппарата Кротова.
2. Провести исследование различных образцов почвы для определения общего микробного числа и коли-титра.
Вопросы для самоподготовки и контроля знаний
1. Дать представление о санитарно-показательных микроорганизмах.
2. Микрофлора воздуха и почвы и источники ее загрязнения.
3. Методы санитарно-бактериологического исследования воздуха.
4. Методы санитарно-бактериологического исследования почвы.
Тема 18. Санитарно-микробиологическое исследование воды
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Дать общее представление о микрофлоре воды, о путях загрязнения, овладеть методами ее исследования.
МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Пробы воды: водопроводная и речная; чашки Петри, в пробирках – расплавленный МПА (столбиком), стерильные пипетки на 1 мл, стерильный физиологический раствор по 9 мл.
Для демонстрации – прибор Зейтца, водоструйный вакуумный насос, мембранные фильтры (№ 3), среда Эндо в чашках; глюкозо-пептонная или лактозо-пептонные среды с индикатором и поплавками, разлитые по колбам и пробиркам. Для определения коли-титра методом бродильных проб заранее делаются посевы воды для получения отрицательных и положительных результатов.
Вода является естественной средой обитания многих микроорганизмов. Особую опасность для здоровья человека и животных представляют патогенные бактерии, которые могут попадать в питьевую воду.
Источниками загрязнения воды патогенными микроорганизмами являются выделения больных и людей, трупы животных, сточные воды, особенно предприятий, перерабатывающих животное сырье и др. Длительность выживания патогенных микробов в воде зависит от их свойств, времени года, наличия питательных веществ и может составлять от нескольких часов до нескольких лет. Так, возбудитель сибирской язвы может сохраняться в воде до 3 лет, бруцеллы до 100 дней, возбудитель туберкулеза до 1 года.
Имеется группа болезней, для которых характерен водный путь распространения (паратифы, лептоспирозы и др.).
Таким образом, вода может стать источником распространения инфекционных болезней и возникновения эпизоотии.
Для санитарно-бактериологической оценки воды проводят следующие исследования:
1) определение общего количества микробов (ОМЧ);
2) Определение коли-титра (КТ) и коли-индекса (КИ);
3) Обнаружение в воде патогенных микроорганизмов.
При санитарно-бактериологических исследованиях пробы воды забирают не менее 0,5 л. Из открытых водоисточников пробу отбирают батометром (рис. 52). Батометр – стерильная емкость с пробкой, в металлическом каркасе и свинцовым грузилом. На нужной глубине пробку открывают, потягивая ее за веревочку. После поднятия батометра пробку заменяют на ватную. Воду из рек, озер отбирают с глубины 10-15 см от поверхности, а при небольшой глубине на расстоянии 10-15 см от дна.
Для отбора проб воды из кранов водопровода используют стерильные колбы на 0,5 л с ватной пробкой. Кран перед забором пробы стерилизуют обжиганием горящим спиртовым тампоном, затем в течение 10 мин спускают воду при полном открытии крана. Пробы воды исследуют тотчас же или не позднее 2 ч с момента взятия. Если это невозможно, то хранят не более 6 ч при 1-5 СС.
Определение общего количества микробов (ОМЧ) в воде. При определении ОМЧ в водопроводной воде производят посев без разведения, внося 1 мл ее в стерильную чашку Петри. При исследовании воду открытых водоемов, сточных вод предварительно разводят стерильной водопроводной водой в зависимости от предполагаемого загрязнения: от 1:10-1 до 1:10-4 , так же вносят из последних разведений по 1 мл в стерильные чашки Петри.
Посевной материал заливают расплавленным и охлажденным до 45°С МПА и после застывания инкубируют в термостате при 37°С 24 ч. После этого срока проводится подсчет выросших колоний и методом расчета определяется общее количество микробов в 1 мл исследуемой воды.