Файл: Practicum_po_microbiologii.doc

Диагноз на ботулизм ставят на основании обнаружения бо-тулинистического токсина в пробах корма и патологического материала или выделения культуры возбудителя болезни.

1. Материал для исследования:

- направляют пробы подозрительных кормов (силос, зерно, комбикорма, мясные и рыбные отходы), а также содержимое желудка, кусочки печени павших и кровь от больных животных.

Рис. 120. Схема лабораторной диагностики ботулизма

2. Микроскопия:

а) методы окраски: простой метод, по Граму;

б) микрокартина: крупные палочки с закругленными концами, на концах споры, напоминающие «теннисную ракетку» (рис. 121);

в) грамположительные;

г) образуют споры;

д) не образуют капсулу;

е) подвижны.

3. Культивирование:

а) посев на питательные среды: МППБ, кровяной МПА;

б) особенности выделения возбудителя:

- строгие анаэробы

- оптимальная температура 37°С:

- срок культивирования 48-72 ч;

- для выделения чистой культуры возбудителя первичный посев прогревают в течение 1 ч при 80ºС и делают посев на кровяной МПА;

в) культуральные свойства:

- на МППБ – помутнение среды; с газообразованием, с характерным запахом прогорклого масла;

- на кровяном МПА – колонии крупные с корневидными отростками, с зоной гемолиза.

Рис. 121. Сl. botulinum в препарате из культуры. Увеличение х900.

4. Биопроба для обнаружения токсина:

- экстракты из исследуемого материала фильтруют и делят на две части, одну из них прогревают 20-30 мин в водяной бане при 100°С;

- заражают фильтратом внутривенно или внутрибрюшинно двух белых мышей;

- подкожно вводят двум морским свинкам;

- при наличии токсина ботулизма животные, зараженные некипяченым фильтратом, погибают на 2-5-й день с характерными клиническими признаками;

- при обнаружении токсина ставят реакцию его нейтрализации с типовыми ботулинистическими сыворотками.

Б. Серологическая диагностика:

- используют реакцию нейтрализации для определения сероваров экзотоксинов.

В. Аллергический метод:

- не используется.

5. Биопрепараты для специфической профилактики:

- анатоксин (для норок).

6. Биопрепараты для специфической терапии:

- в ветеринарии не используют.

41.3. Возбудитель некробактериоза (фузобактериоза)

1. Классификация возбудителя

Род: Fusobacterium (веретенообразные)

Вид: F. necrophorum

2. Общая характеристика болезни:

Некробактериоз – хроническая инфекционная болезнь, характеризующаяся гнойно-некротическими поражениями кожи, слизистых оболочек и конечностей.

3. Восприимчивые животные:

- все виды, включая птиц. Восприимчив и человек.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- возбудитель в организм проникает через различные повреждения кожи и слизистых оболочек, где и вызывает первичный воспалительный процесс. Далее возбудитель мигрирует в легкие, кишечник, печень и другие органы, вызывая некротические поражения. Факторами вирулентности являются эндотоксины.

Методы диагностики

А. Бактериологический метод (рис. 122)

1. Материал для исследования:

- при жизни берут соскобы на границе здоровой и некротизированной тканей;

- посмертно – трупы мелких животных, пораженные ткани, паренхиматозные органы с некротическими очагами.

2. Микроскопия:

а) методы окраски: простой метод, по Граму, по Муромцеву;

б) микрокартина: возбудитель полиморфен – в виде кокков, палочек до 3 мкм и нитей (рис. 123);

в) грамотрицательные;

г) спор не образуют;

д) капсул не образуют;

е) неподвижны.

Рис. 122. Схема лабораторной диагностики некробактериоза

3. Культивирование:

а) посев на питательные среды: МППБ, сывороточный сахарный агар;

б) особенности выделения возбудителя:

- строгий анаэроб;

- оптимальная температура 37°С;

- срок культивирования до 5 дней.

в) культуральные свойства:

- на МППБ – интенсивное помутнение, слабое газообразование;

Рис. 123. F. necrophorum в препарате из культуры. Увеличение х900

- на сывороточном сахарном агаре – мелкие росинчатые колонии.

4. Биопроба

- заражают кроликов подкожно в среднюю треть наружной поверхности уха, происходит некроз уха;

- заражают белых мышей подкожно в область корня хвоста (на 8-й день в области инъекции развивается припухлость и нагноение, хвост отпадает).

Б, В. Серологические и аллергические методы:

- не применяются.

5. Биопрепараты для специфической профилактики:

- инактивированная формолвакцина, ассоциированные вакцины «НекоВАК» и «Нековак стимул».

6. Биопрепараты для специфической терапии:

- гипериммунная сыворотка против некробактериоза рогатого скота.

41.4. Возбудитель копытной гнили

1. Возбудитель.Bacteroides nodosus

2. Общая характеристика болезни:

Копытная гниль – хроническая инфекционная болезнь, характеризующаяся мацерацией и воспалением кожи межкопытной щели, гнойно-гнилостным распадом копытного рога.

3. Восприимчивые животные:

- козы, овцы.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- возбудитель, попав на мацерированную кожу межкопытной щели, начинает размножаться и вырабатывает фермент протеазу, которая разрушает кератин;

- образует экзотоксин, вызывающий воспаление и гнойно-гнилостный распад тканей.

Методы диагностики

А. Бактериологический метод (рис. 124);

1. Материал для исследования:

- свежепораженные участки кожи копытец и слизь в межпальцевой щели.

2. Микроскопия:

а) методы окраски: простой метод, по Граму;

б) микрокартина: полиморфные – крупные до 8 мкм прямые или слегка изогнутые палочки, встречаются мелкие палочки с утолщениями на концах в виде гантелей;

Рис. 124. Схема лабораторной диагностики копытной гнили

в) грамотрицательные;

г) спор не образуют;

д) капсулу не образуют;

е) неподвижны.

3. Культивирование:

а) посев на питательные среды: МППБ (полужидкий и жидкий); на жидкой среде с добавлением 2-5 % триптического перевара порошка копытного рога.

б) особенности выделения возбудителя:

- анаэробы;

- оптимальная температура 37°С;

- срок культивирования 18-20 ч.

в) культуральные свойства:

- на жидких средах – в виде тяжей, на дне осадок;

- на плотных средах – плоские блестящие шероховатые колонии.

4. Биопроба:

- заражают ягнят путем аппликации материала в межкопытную щель.

Б. Серологические методы:

- РСК, РИФ.

В. Аллергические методы не используют.

5. Биопрепараты для специфической профилактики:

- инактивированная вакцина.

6. Биопрепараты для специфической терапии:

- не разработаны.

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить культуральные свойства возбудителей (демонстрация).

2. Готовые (фиксированные) препараты, приготовленные из возбудителей, окрасить по Граму, провести микроскопирование.

3. Демонстрация белых мышей с клиническими признаками ботулизма, столбняка и некробактериоза.

Тема 42. Возбудители туберкулеза (42.1) и паратуберкулеза (42.2)

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства возбудителей и методы микробиологической диагностики.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы таблицы, готовый препарат-мазок микобактерий туберкулеза, окрашенный по методу Циля-Нильсена; культура микобактерий на среде Петраньяни и на глицерином картофеле (в запаянных пробирках), биопрепараты. Вакцина БЦЖ, кислотоустойчивые бактерии, пробирки со средой Петраньяни, Леванштейна-Йенсена, с глицериновым МПБ.

При подготовке к занятию ответить на следующие вопросы:

1. Название видов возбудителей туберкулеза и паратуберкулеза.

2. Морфологические, тинкториальные особенности видов туберкулеза и паратуберкулеза. Методика окраски микобактерий по Циль-Нильсену.

3. Культуральные свойства и идентификация видов микобактерий туберкулеза и паратуберкулеза.

4. Бактериологическая диагностика туберкулеза.