Файл: Practicum_po_microbiologii.doc

Ацидофильная палочка в отличие от других молочнокислых бактерий хорошо приживается в желудочно-кишечном тракте. Это объясняется тем, что ацидофильные бактерии относятся к постоянным обитателям желудочно-кишечного тракта молодняка, находящегося на молочном вскармливании. При переходе на смешанное кормление ацидофильная палочка заменяется другими микроорганизмами. Ацидофильная палочка образует больше молочной кислоты, антибиотических веществ, чем другие молочнокислые бактерии, которые губительно действуют на гнилостные, болезнетворные виды бактерий. Поэтому рекомендуют использовать ацидофильные препараты для профилактики и лечения болезней молодняка, а также для ускорения восстановления полезной микрофлоры кишечника, при дисбактериозах.

Специально для нужд животноводства ветеринарные лаборатории выпускают ацидофильные препараты АБК (ацидофильно-бульонная культура) и ПАБК (пропионово-ацидофильная бульонная культура).

В пастеризованное молоко (обрат) вносят 3-5% закваски, содержащей чистую культуру L. acidophilus, перемешивают и ставят в термостат при 40-42ºС, сгусток образуется через 6-8 ч – он должен иметь однородную, тягучую консистенцию.

При микроскопии ацидофильного молока в поле зрения обнаруживают крупные палочки, Грам⁺, расположенные одиночно или в виде коротких цепочек (рис. 57).

Сметана. В пастеризованные при 85- 90°С сливки вносят 0,5-3% лабораторной закваски, состоящей из Str. lactis или Str. cremoris. Заквашивание происходит при 30°С в течение 8-12 ч.

При микроскопии сметаны в поле зрения должны быть видны молочнокислые стрептококки, расположенные парно или в виде коротких цепочек (рис. 58).

Рис. 57. Микроскопия в препарате, приготовленном из ацидофильного молока

Рис. 58. Микроскопия в препарате, приготовленном из сметаны

Кефир – кисломолочный продукт смешанного брожения, для приготовления которого используют кефирные грибки. Кефирные грибки имеют определенную структуру и ведут себя биологически как живой саморегулирующийся организм: они растут, делятся и обладают наследственностью.

При гистологическом исследовании срезов видны переплетения нитей, которые образуют строму грибка, удерживающую остальную группу микроорганизмов:

1. Мезофильные молочнокислые стрептококки (Str. lactis, Str. cremoris).

2. Мезофильные молочнокислые палочки (Веtа- и Streptobacterium).

3. Термофильные молочнокислые палочки (L. casei).

4. Молочные дрожжи прочно связаны со стромой гриба.

Молочнокислые бактерии, гидролизуя лактозу, снабжают молочные дрожжи кислотой, необходимой им для жизнедеятельности, а дрожжи, вызывая спиртовое брожение, насыщают продукт углекислотой, что придает кефиру особый вкус.

Методика приготовления грибковой кефирной закваски: в пастеризованное молоко вносят кефирные зерна в соотношении 1:20, оптимальная температура 15-22°С в течение 14-16 ч. Затем закваску процеживают через сито и используют как производственную закваску для приготовления кефира.

Качество закваски ежедневно проверяют, определяют активность (время сквашивания, кислотность), наличие посторонней микрофлоры путем просмотра микроскопического препарата в 10 полях зрения микроскопа (рис. 59), качество сгустка, вкус и запах.

Кумыс — кисломолочный напиток, готовят из кобыльего молока, которое резко отличается от коровьего по химическому составу (жира 1,5-2,0 %, сахара 6,0% и высокое содержание альбумина).

В молоке кобылиц преобладает альбумин, который при воздействии молочной кислоты образует рыхлый, неплотный сгусток с мелкими хлопьями, поэтому сквашенное кобылье молоко остается жидким.

Рис. 59 1 – микрокартина в препарате, приготовленном из кефира, 2 – кефирные зерна

Кумыс, как и кефир, является продуктом смешанного брожения, причем главную роль играет спиртовое брожение (от 1,0 до 2,5% спирта).

Кобылье молоко необходимо получать с особым соблюдением всех санитарно-гигиенических требований, так как кобылье молоко нельзя пастеризовать. При пастеризации оно свертывается, поэтому закваску вносят в парное молоко, состоящую из болгарской молочнокислой палочки и дрожжей рода Torula (рис.60).

Сквашивание происходит при 26°С в течение 6-8 ч.

В домашних условиях в кобылье молоко вносят в качестве закваски кумыс прежней выработки.

Рис. 60. Микрокартина в препарате, приготовленном из кумыса

Задания для самостоятельно работы

1. Провести постановку редуктазной пробы молока различной бактериальной загрязненности. Дать оценку качества различным пробам молока по этому показателю.

2. Провести определение ингибиторов в различных пробах молока. Дать оценку качества различным пробам молока по этому показателю.

3. Определить общее микробное число сырого и пастеризованного молока методом посева на питательные среды.

4. Изучить морфологические особенности бактерий молочнокислых продуктов, микрокартину зарисовать.

Вопросы для самоподготовки и контроля знаний

1. Назвать санитарно-бактериологические показатели, используемые для оценки качества молока.

2. Какими методами исследуют молоко на редуктазу, на обнаружение антибиотиков, значение этих показателей при оценке качества молока.

3. С какой целью проводят пастеризацию молока?

4. Как определяют общее микробное число и коли-титр молока?

5. Какие методы используют для санитарно-микробиологического исследования молочнокислых продуктов для оценки их качества?

Раздел III. Серологическая диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных

Серологическая диагностика основана на проведении различных серологических реакций. Свое название они получили от латинского слова serum, что означает сыворотка крови, являющаяся обязательным компонентом всех серологических реакций. В основу практического применения этих реакций положен принцип тесной физико-химической связи между родственными антигеном и антителом. На основании этого принципа по одному известному компоненту можно сделать заключение о природе другого, т.е. природе неизвестного. Таким образом, во всех серологических реакциях участвуют два основных компонента — антиген и антитело, реакция между которыми осуществляется в электролитической среде. В качестве последней используют 0,85%-ный раствор поваренной соли (физиологический раствор).

Антигены – естественные или синтетические высокомолекулярные генетически чужеродные вещества, распознаваемые клетками организма и вызывающие иммунный ответ в виде образования антител (иммуноглобулинов Ig), появления сенсибилизированных лимфоцитов или развитии толерантности к данному антигену.

Реакции антиген-антитело, происходящие in vivo – это важнейший защитный механизм устранения множества антигенов, с которыми организм сталкивается в любой момент.

К антигенам, имеющим значение в ветеринарии, относят живые и убитые микроорганизмы, их структурные образования (корпускулярные антигены), продукты их жизнедеятельности – токсины, ферменты, продукты метаболизма (растворимые антигены). Антигены для проявления своего действия должны быть:

- генетически чужеродными;

- высокомолекулярными соединениями — это, прежде всего белки (полноценные антигены) и полисахариды, липополисахариды и др. (неполноценные антигены – гаптены);

- парентеральное введение (попадание) в организм, т.е. минуя желудочно-кишечный тракт.

Полноценные антигены способны в организме животного вызывать образование антител (Ig), а также вступать с ними в реакцию in vitro.

В дальнейшем гаптены способны реагировать с образовавшимися антителами без in vitro белка.

Антитела – защитные белки, относящиеся в основном к фракции гамма-глобулинов, способные распознавать антиген и реагировать с ним, лишая его вредного воздействия на организм животного. Антитела вырабатываются зрелыми плазматическими клетками (В-лимфоцитами) и поступают из лимфоидной системы в кровь.

Серологические реакции используют для:

1. Серодиагностики – выявления в сыворотке крови больного животного антител к тому или иному антигену, микроорганизму.

2. Сероидентификации – определение вида микроорганизма или неизвестного антигена по известному антителу.

В зависимости от физико-химического состава антигена, функциональных групп антител, участвующих в серологических реакциях, и условий, в которых взаимодействуют антигены и антитела, различают реакции: преципитации, агглютинации, лизиса, связывания комплемента, нейтрализации, опсоно-фагоцитарная и др.

Тема 21. Реакция преципитации: кольцепреципитации (21.1), диск-преципитации (21.2), диффузионной преципитации (21.3)

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Дать представление о сущности реакции преципитации, применении ее в ветеринарно-лабораторной практике, получении и подготовке компонентов; освоить методы постановки реакции. Ознакомить с различными модификациями проведения реакции преципитации.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Преципитационные пробирки в штативах, пастеровские пипетки с грушами или одноразовые шприцы на 1 мл с иглами. Компоненты: преципитирующая сибиреязвенная сыворотка, антиген (экстракт из кожевенного сырья — положительный, отрицательный), для контроля – положительный сибиреязвенный антиген. Демонстрация реакции диффузионной преципитации в агаровом геле (микро- и макрометод), соответствующие таблицы.

Сущность реакции состоит в осаждении (преципитации) антигена, находящегося в высокодисперсном состоянии, под воздействием специфических антител в растворе электролита. Растворимый антиген, участвующий в реакции, называется преципитиногеном.

Антитела, реагирующие с растворенным антигеном, обеспечивающие выпадение мелкодисперсионного осадка комплекса антиген-антитело в среде электролита, называются преципитинами.

Реакция является высокочувствительным тестом. Посредством ее можно выявить специфический антиген в разведении 1:100 тыс. и даже 1:300 тыс., т.е. в столь малых количествах, в которых он не обнаруживается химическим путем.

Реакция преципитации применяется для диагностики инфекционных болезней, вызываемых как бактериями, так и вирусами.

В ветеринарии реакции преципитации широко используют для исследования кожевенного и мехового сырья, шерсти, мяса, загнившего патологического материала на сибирскую язву. Это особенно важно, когда не представляется возможным выделение самого возбудителя.