Файл: Practicum_po_microbiologii.doc

- дальнейшее изучение для установления видовой принадлежности проводят путем посевов на длинный «цветной ряд», в состав которого входят углеводы, и другие тесты;

- сальмонеллы не разжижают желатин, образуют сероводород, не образуют индол;

- дают положительную реакцию с метиловым красным: среда окрашивается в розово-красный цвет, отрицательную реакцию Фогеса-Проскауэра — желтое окрашивание среды.

д) биопроба:

- в необходимых случаях заражают подкожно белых мышей.

Б. Серологический метод:

- используют РА с сывороткой крови (кровью) при диагностике паратифозного аборта кобыл, поллуроза у кур;

- используют РА для дифференциации выделенной культуры сальмонелл с целью определения их вида и сероварианта;

- у сальмонелл различают соматический термостабильный О-антиген и жгутиковый термолабильный Н-антиген;

- культуру сальмонелл предварительно проверяют с групповыми (поливалентными) сальмонеллезными агглютинирующими О-сыворотками в РА на стекле. На основе общего для нескольких видов сальмонелл О-антигена они подразделяются на серологические группы, обозначаемые заглавными буквами латинского алфавита. При положительном результате с групповой сывороткой проводят испытания той же культуры, выросшей на скошенном МПА с отдельными монорецепторными О-сыворотками, входящими в смесь поливалентной сыворотки. Затем эти же культуры испытывают с монорецепторными Н-сыворотками, 1-й и 2-й фазы, обозначенными цифрами и малыми буквами;

- используют реакцию иммунофлуоресценции (РИФ).

В. Аллергический метод:

- не применяется.

4. Биопрепараты для специфической профилактики:

- инактивировшная концентрированная формолвакцина против паратифа телят и поросят;

- живая вакцина против паратифа свиней из штамма ТС-177.

5. Биопрепараты для специфической терапии:

- поливалентная антитоксическая сыворотка против паратифа и колибактериоза в двух вариантах:

а) для телят, ягнят, овец и птиц;

б) для телят, поросят, ягнят, овец и птиц:

- бактериофаг против паратифа и колибактериоза телят

- бактериофаг против пуллороза – тифа птиц.

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить культуральные свойства сальмонеллы на обычных и дифференциально-диагностических средах.

2. Приготовить препараты-мазки из суточных культур сальмонелл, окрасить их по Граму и провести микроскопирование.

3. Приготовить препараты «висячая» капля из суточной культуры сальмонелл и исследовать на подвижность.

4. Приготовить препарат-отпечаток из органов белой мыши, павшей от сальмонелл, окрасить по Граму, провести микроскопию.

5. Изучить биохимические свойства сальмонелл на средах «короткого» и «длинного» цветного ряда.

6. Провести видовую дифференциацию сальмонелл в РА с поливалентными и монорецепторными сыворотками.

Тема 32. Возбудитель листериоза

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства возбудителя и методы бактериологической диагностики листериоза.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы: таблица-схема бактериологической диагностики листериоза, суточная культура листерий, выращенная в средах с углеводами, биопрепараты. Трупы белых мышей, павших после заражения вакцинным штаммом листерий, наборы стерильных инструментов для вскрытия, 12-часовая бульонная культура вакцинного штамма листерий, флюоресцирующая листериозная сыворотка.

При подготовке к занятию необходимо хорошо уяснить следующие вопросы:

1. Морфологические и культуральные свойства листерий.

2. Схема бактериологической диагностики листериоза.

3. Дифференциация возбудителя листериоза от рожи свиней.

1. Классификация возбудителя

Род: Listeria

Вид: L. monocytogenes

2. Общая характеристика болезни

Листериоз – инфекционная болезнь, характеризующаяся у животных поражением нервной системы, септическими явлениями, абортами и маститами.

3. Восприимчивые животные:

- все виды сельскохозяйственных животных, включая птиц;

- болеет человек.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- заражение происходит алиментарным путем;

- возбудитель распространяется гематогенным и лимфогенным путями, вызывая дегенеративные изменения в паренхиматозных органах, поражает нервную и половую системы;

- факторы вирулентности – эндотоксины и агрессины.

Методы диагностики представлены на рис. 86.

Рис. 86. Схема лабораторной диагностики листериоза

А. Бактериологический метод

1. Материал для исследования:

- трупы мелких животных, паренхиматозные органы, головной мозг, абортированные плоды.

2. Микроскопия:

а) методы окраски: простой метод, по Граму;

б) микрокартина: полиморфные палочки до 3 мкм, располагаются одиночно, попарно, часто располагаются в виде римской цифры V (рис. 87);

в) грамположительные;

г) спор не образуют;

д) капсулу не образуют;

е) подвижны в молодых культурах, выращенных при комнатной температуре.

3. Культивирование:

а) посев на питательные среды:

- обогащенные МПА и МПБ;

б) особенности выделения возбудителя:

- факультативные аэробы,

- оптимальная температура 37°С,

- срок культивирования (ежедневный просмотр) до 3-4 сут,

в) культуральные свойства:

- на МПБ помутнение среды с образованием осадка;

- на МПА – мелкие, круглые, прозрачные колонии (рис. 88).

г) биохимические свойства:

- обладают сахаролитическими свойствами — расщепляют салицин;

- не разжижают желатин; не образуют индола и сероводорода;

- выделяют каталазу;

- обладают гемолитическими свойствами;

д) биопроба:

- заражают внутрибрюшинно или внутривенно белых мышей или кроликов,

- кератоконъюнктивальная проба.

Рис. 87. Возбудитель листериоза из чистой агаровой культуры. Увеличение х900

Рис. 88. Рост возбудителя листериоза на плотной питательной среде. Увеличение х900

Б. Серологический метод:

- РА и РСК с сывороткой крови исследуемых животных; РА – для дифференциации выделенных листерий (микробная культура и поливалентная листериозная сыворотка).

В. Аллергические методы:

- не получили распространения.

4. Биопрепараты для специфической профилактики:

- живая вакцина АУФ.

5. Биопрепараты для специфической терапии:

- отсутствуют.

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить культуральные свойства возбудителя листериоза на МПА и МПБ.

2. Приготовить препараты-мазки из агаровой культуры листерий, окрасить по Граму и микроскопировать.

3. Приготовить препараты-мазки из органов белой мыши, павшей от возбудителя листериоза, окрасить по Граму, провести микроскопирование.

4. Изучить дифференцирующие признаки возбудителей листериоза и рожи свиней.

Тема 33. Возбудитель рожи свиней

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства возбудителя и методы бактериологической диагностики рожи свиней.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходима таблица-схема бактериологической диагностики рожи свиней, биопрепараты. Трупы мышей (голубей), павших после заражения вакцинным штаммом возбудителя рожи свиней, набор инструментов для вскрытия животных, скошенный МПА, МПЖ в пробирках, пастеровские пипетки, культуры возбудителя рожи свиней на средах Гисса с глюкозой, лактозой, маннитом, в МПБ с индикаторной бумажкой на сероводород.

При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:

1. Морфологические и культуральные свойства возбудителя рожи свиней.

2. Схема бактериологической диагностики рожи свиней.

3. Дифференциация возбудителя рожи свиней от листериоза.

1. Классификация возбудителя

Род: Erysipelothrix

Вид: E. rhusiopathiae

2. Общая характеристика болезни:

Рожа свиней – инфекционная болезнь, характеризующаяся при остром течении септицемией и воспалительной эритемой кожи, при подостром – "крапивницей", при хроническом – эндокардитом и артритами.

3. Восприимчивые животные:

- преимущественно свиньи в возрасте от 3 до 12 мес.;

- могут болеть ягнята, овцы, птица и др.;

- восприимчив человек;

- носителями являются морские и пресноводные рыбы.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- заражение происходит в основном алиментарно,

- проникшие бактерии вначале оседают в миндалинах и солитарных фолликулах, где они размножаются и своими токсинами вызывают сенсибилизацию организма, которая проявляется в виде различных поражений кожи,

- гематогенным и лимфогенньм путем разносится по всему организму, вызывая сепсис,

- факторами вирулентное являются эндотоксины и агрессины.

Методы диагностики (рис. 89)

А. Бактериологический метод:

1. Материал для исследования:

- труп целиком, паренхиматозные органы, сердце, трубчатая кость.

2. Микроскопия:

а) методы окраски: простой метод, по Граму;

б) микрокартина: тонкие, прямые или слегка изогнутые палочки до 1,5 мкм (рис. 90);