ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 24.04.2024
Просмотров: 1052
Скачиваний: 2
СОДЕРЖАНИЕ
Министерство сельского хозяйства
Бактериологическая диагностика
1.2. Техника безопасности при работе в ветеринарной лаборатории
1.3. Общая схема проведения бактериологической диагностики
1.4. Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала
Сопроводительное письмо на патологический материал
Задания для самостоятельной работы
2.1. Устройство оптического микроскопа.
2.2. Виды микроскопии и их назначение
3.1. Техника приготовления препаратов для микроскопии
3.2. Бактериологические краски
3.3. Простой метод окрашивания препарата для микроскопии
Задания для самостоятельной работы
Вопросы для самоподготовки и контроля знаний
Тема 4. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий (4.1). Окраска по Граму (4.2)
4.1. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий
Задания для самостоятельной работы
Тема 5. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий: окраска спор (5.1) и капсул (5.2)
Тема 6. Назначение и классификация питательных сред для бактерий (6.1) и их приготовление (6.2)
6.1. Назначение и классификация питательных сред
Классификация питательных сред
6. 2. Приготовление питательных сред
Тема 7. Стерилизация. Методы: физические (7.1), химические (7.2), механические (7.3)
8.1. Техника посевов бактерий на питательные среды
8.2. Методы культивирования бактерий
8.3. Методы выделения чистых культур бактерий
Тема 9. Культуральные свойства бактерий на плотных (9.1) и в жидких (9.2) питательных средах
9.1. Культуральные свойства бактерий на плотных питательных средах
9.2. Культуральные свойства бактерий в жидких питательных средах
Тема 10. Ферментативные (биохимические) свойства бактерий
1. Определение ферментации углеводов
2. Определение протеолитических свойств
3. Определение редуцирующей (восстанавливающей) способности
11.1. Методы серийных разведений
Критерии оценки чувствительности стафилококков к пенициллину
11.2. Метод диффузии в агар (метод бумажных дисков)
Тема 12. Исследование бактерий на подвижность
В. Биологические методы исследований
13.1. Методы заражения лабораторных животных
13.2. Определение вирулентности микробов
13.3. Бактериологическое исследование трупа
Тема 14. Культивирование анаэробных микроорганизмов
Тема 15. Методы изучения микроскопических грибов и ак-тиномицетов
Тема 16. Методы изучения риккетсий (16.1), хламидий (16.2) и микоплазм (16.3)
16.1. Методы изучения риккетсий
16.2. Методы изучения хламидий
16.3. Методы изучения микоплазм
Раздел II. Основы санитарной микробиологии
Тема 17. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха (17.1) и почвы (17.2)
17.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы
Санитарно-бактериологические показатели почвы
Тема 18. Санитарно-микробиологическое исследование воды
19.1. Методы количественного определения микробов в исследуемых объектах
19.2. Санитарно-микробиологическое исследование мяса
Тема 20. Санитарно-микробиологическое исследование молока (20.1) и кисломолочных продуктов (20.2)
Классификация молока по редуктазе
Показатели бактериальной чистоты питьевого молока
20.2. Санитарно-микробиологическое исследование кисломолочных продуктов
Раздел III. Серологическая диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных
21.1. Реакция кольцепреципитации
21.2. Реакция диск-преципитации
21.3. Реакция диффузионной преципитации (рдп)
22.1. Постановка реакции агглютинации классическим (пробирочным) методом
22.2. Другие модификации постановки реакции. Кольцевая реакция с молоком (кр)
Тема 23. Реакция связывания комплемента (рск)
Задания для самостоятельной работы (для трех занятий)
Тема 24. Методы люминесцентной микроскопии
Тема 25. Иммуноферментный метод (ифм) диагностики инфекционных болезней
Тема 26. Использование в микробиологии полимеразной цепной реакции (пцр)
Тема 27. Использование в микробиологии днк-зондов
Раздел IV. Специальная (частная) микробиология
Тема 28. Патогенные стафилококки.
Тема 29. Патогенные стрептококки
Тема 30. Возбудители эшерихиозов
Тема 31. Возбудители сальмонеллезов
Тема 32. Возбудитель листериоза
Тема 33. Возбудитель рожи свиней
Тема 34. Возбудитель антропозоонозной чумы
Тема 35. Возбудители гемофилезов
Тема 36. Возбудитель пастереллеза
Тема 37. Возбудитель туляремии
Тема 38. Возбудитель бруцеллеза
Тема 39. Возбудитель сибирской язвы
40.1. Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкара)
40.2. Возбудители злокачественного отека
40.3. Возбудитель брадзота овец
40.4. Возбудитель инфекционной анаэробной энтеротоксемии
41.3. Возбудитель некробактериоза (фузобактериоза)
41.4. Возбудитель копытной гнили
Тема 42. Возбудители туберкулеза (42.1) и паратуберкулеза (42.2)
42.2. Возбудитель паратуберкулеза
Тема 43. Возбудитель актиномикоза
Тема 45. Возбудитель лептоспироза
Тема 46. Возбудитель кампилобактериоза (вибриоза)
Тема 47. Возбудитель дизентерии свиней
Тема 48. Возбудители микоплазмозов
Тема 49. Возбудители риккетсиозов
Тема 50. Возбудители хламидиозов
Тема 52. Возбудители микотоксикозов
Задания для програмированного контроля знаний студентов по частной ветеринарной микробиологии
Ответы на задания для программированного контроля по разделу «Частная микробиология»
А. Н-агглютинация.
Б. О-агглютинация.
8. Проведена реакция агглютинации методом кольцевой пробы с молоком на бруцеллез, в результате чего проба молока стала белой и на его поверхности образовалось синее кольцо. Дайте оценку реакции.
А. Положительная.
Б. Отрицательная.
Тема 23. Реакция связывания комплемента (рск)
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Дать представление о сущности реакции связывания комплемента, применении ее в ветеринарно-лабораторной практике, получении и подготовке компонентов; освоить методы титрации компонентов для РСК, провести постановку главного опыта. Ознакомить с различными модификациями проведения РСК.
МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Пробирки в штативах, пипетки на 1,5 мл, резиновые груши, водяная баня с терморегулятором. Компоненты: физиологический раствор, гемолизин (1:100), эритроциты барана (1:40), комплемент (1:20), единый бруцеллезный антиген для РА и РСК, бруцеллезная (позитивная) и нормальная (негативная) сыворотки.
Демонстрационные наборы с результатами: проверки компонентов на антикомплементарность и гемотоксичность; титрования гемолитической сыворотки. Готовая шкала для оценки степени гемолиза эритроцитов. Таблицы по теме.
РСК, как и все серологические реакции, может быть использована в следующих направлениях:
1) для выявления специфических антител в сыворотке крови больных животных с включением в реакцию известного антигена при диагностике бруцеллеза, сапа, листериоза, лептоспироза и др.;
2) для определения в исследуемом материале специфического антигена с использованием известных иммунных сывороток, при диагностике ящура и установления его серотипов и др.
Сущность РСК заключается в том, что при взаимодействии антитела со специфическим для него антигеном происходит процесс связывания комплемента на этом комплексе. Этот процесс не проявляется визуально. Для выявления связывания комплемента к смеси, состоящей из антигена, антитела и комплемента, вводится гемолитическая система, состоящая из гемолитической сыворотки (гемолизина) и эритроцитов барана (рис. 68).
Рис. 68. Схема постановки реакции связывания комплемента: Аг – антиген; Ат – антитело; Эр – эритроциты; Гем. сыв. – гемолитическая сыворотка
Происходит полное связывание комплемента, если взятые для исследования антиген и антитело специфичны, гемолиз не происходит. На дне пробирки после инкубации в течение 20 мин при 37 °С и последующем выдерживании смеси в течение 20-24 ч при комнатной температуре образуется осадок негемолизированных эритроцитов. Если же антиген и антитело неспецифичны и не образуют комплекса, связывающего комплемент, последний остается в свободном состоянии и связывается в гемолитической системе, вследствие чего наступает гемолиз эритроцитов. Исследуемая смесь приобретает красный лаковый цвет, РСК, как и другие реакции иммунитета, протекает при строгих количественных соотношениях, взятых в опыт компонентов и точно оттитрованных количествах комплемента, гемолитической сыворотки, антигена и антител.
Существуют различные модификации реакции связывания комплемента, мы представляем методику постановки РСК при диагностике бруцеллеза. Реакция проходит в водяной бане при 37-38 °С в объеме 1 мл (по 0,2 мл каждого компонента – сыворотки, антигена, комплемента, гемолизина и эритроцитов).
При диагностике сапа и других болезней РСК ставится в объеме 2,5 мл, каждый из компонентов, входящих в реакцию, берется в объеме 0,5 мл.
До проведения главного опыта РСК определяют качество и проводят титрацию всех компонентов, входящих в реакцию.
1. Исследуемые сыворотки и контрольные (позитивная и негативная) разводят физраствором 1:5 или 1:10 и прогревают в водяной бане в течение 30 мин при 56-58°С для разрушения собственного комплемента.
2. Антиген бруцеллезный единый для РА, РСК, РДСК, изготовляемый на биофабрике, представляет собой гомогенную взвесь инактивированных нагреванием и карболовой кислотой бруцелл в физиологическом растворе.
3. Комплемент – нестойкий, легко разрушающийся компонент свежей сыворотки крови всех видов животных. Комплемент – вещество белковой природы, быстро инактивируется при нагревании, под действием света, слабыми растворами щелочей и кислот и др.
В наибольшем и в более постоянном количестве комплемент содержится в сыворотке крови морских свинок, поэтому ее используют в РСК. Кровь у морской свинки берут пункцией из сердца. Взятую в стерильную пробирку кровь ставят на 15-20 мин в термостат, затем кровяной сгусток отделяют стеклянной палочкой от стенки пробирки, оставляют в покое на 15-20 минут. Сыворотку отсасывают, переносят в чистую пробирку и хранят в холодильнике.
В настоящее время биопредприятия выпускают комплемент в лиофилизированном виде.
Для реакции комплемент разводят в физрастворе и определяют его активность.
4. Эритроциты барана. Кровь от барана (овцы) берут из яремной вены с соблюдением правил асептики в сосуд с бусами (стеклянными или фарфоровыми), закрытый ватной пробкой и дефибринируют продолжительным встряхиванием.
Полученную кровь центрифугируют при 1500-2000 об/мин, после чего надосадочную жидкость из центрифужной пробирки удаляют, а оставшуюся эритроцигарную массу ресуспензируют в физрастворе и вновь центрифугируют. Эти операции продолжают до тех пор пока жидкость над эритроцитами становится прозрачной. Отмытые эритроциты разводят для реакции физраствором 1:40, т.е. получают 2,5%-ную взвесь эритроцитов.
5. Гемолитическая сыворотка (гемолизин) получают на биопредприятиях путем гипериммунизации кроликов 25 или 50%-ной взвесью эритроцитов в физрастворе. Взвесь эритроцитов вводят роликам внутривенно 4-5 раз с 3-4-дневными интервалами. Через 7 дней после последнего введения у кроликов берут кровь. Получению сыворотку инактивируют 30 мин при 56-58° для разрушения кроличьего комплемента. Гемолизин консервируют глицерином 1:1 или 0,5%-ным фенолом и разливают по ампулам.
1. Проверка компонентов на антикомплементарность и гемо-токсичность по следующей схеме
Таблица 10
Компоненты |
Проверка на |
||||
антиком племен-тарность |
гемотоксичность |
||||
компле мента |
гемоли зина |
антигена |
физрас твора |
||
Комплемент в разведении 1:20 |
0,2 |
0,2 |
_ |
_ |
- |
Гемолизин в рабочем титре |
0,2 |
- |
0,2 |
- |
- |
Антиген в рабочем титре |
0,4 |
- |
- |
0,4 |
- |
Эритроциты (2,5%-ная взвесь) |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
Физиологический раствор |
- |
0,6 |
0,6 |
0,4 |
0,8 |
Водяная баня – 10 мин при 37-38°С.
Результат: Гемолиз. Полная задержка гемолиза.
В реакции используют компоненты, не обладающие антикомплементарными и гемотоксическими свойствами.
2. Титрование гемолизина проводят периодически один раз в 3 месяца при использовании каждой новой серии.
Для титрации гемолизина готовят разведения от 1:500 до 1:4000 по следующей схеме:
Таблица 11
Основные разведения гемолизина 1:100, мл |
Физиологический раствор, мл |
Получаемые разведения |
0,4 |
1,6 |
1:500 |
0,1 |
0,9 |
1:1000 |
0,1 |
1,4 |
1:1500 |
0,1 |
1,9 |
1:2000 |
0,1 |
2,4 |
1:2500 |
0,1 |
2,9 |
1:3000 |
0,1 |
3,4 |
1:3500 |
0,1 |
3,9 |
1:4000 |
После приготовления разведений гемолизина приступают к его титрованию по схеме.
Таблица12
Схема титрования гемолизина
Компоненты |
Разведение гемолизина |
|||||||
1:500 |
1:1000 |
1:1500 |
1:2000 |
1:2500 |
1:3000 |
1:3500 |
1:4000 |
|
Гемолизин |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
Комплемент (1:20) |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
Эритроциты (2,5%-ная взвесь) |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
Физраствор |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
Водяная баня 10 мин при 37-38С |
||||||||
Примерный результат |
ПГ |
ПГ |
ПГ |
ЧГ |
ЧГ |
ЧГ |
ЧГ |
ЧГ |