Файл: Practicum_po_microbiologii.doc

Тема 9. Культуральные свойства бактерий на плотных (9.1) и в жидких (9.2) питательных средах

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Ознакомить студентов с основными культуральными свойствами бактерий. Продолжить выделение чистой культуры бактерий (2-й день исследования).

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Посевы, сделанные на предыдущем занятии, культуры на МПБ (для демонстрации). Лупы, стереоскопический микроскоп. Питательные среды в пробирках: МПБ, скошенный МПА. Бактериологические петли, спиртовки, предметные стекла, набор красок для окрашивания по Граму. Микроскопы. Таблицы, схемы, рисунки.

У выделенных чистых бактериальных культур изучают культуральные свойства.

Культуральными свойствами бактерий называют характер их роста на плотных и жидких питательных средах.

Изучение культуральных свойств бактерий наряду с другими – морфологическими, тинкториальными, биохимическими, серологическими (антигенными) и патогенными – необходимо при проведении бактериологической диагностики с целью идентификации выделенных бактерий из исследуемого материала.

9.1. Культуральные свойства бактерий на плотных питательных средах

На этих средах бактерии растут в виде колоний, которые подвергают изучению (рис. 28).

1. Макроскопическое изучение колоний в проходящем свете проводится невооруженным глазом. Чашку поворачивают дном к себе на расстоянии лучшей видимости. При наличии двух различных видов колоний их нумеруют и описывают каждую в отдельности. В протоколе отмечают следующие данные:

а) величина колоний (крупная – 4-5 мм в диаметре и более, средняя – 2-4 мм, мелкая – 1-2 мм, карликовая – не более 1 мм);

Рис 28. Культуральные свойства бактерий на плотных питательных средах: 1 — Круглые с ровными краями; 2 – круглые, выпуклые, блестящие, слизистой консистенции; 3 – с неровными краями; 4 – круглые с валиком по периферии; 5 – зернистые; 6 – плоские листовидные; 7 - ветвистые; 8 - складчатые

б) форма очертаний колоний (правильно и неправильно округлая, розеткообразная, ризоидная и др.);

в) степень прозрачности (плотная – непрозрачная, полупрозрачная, прозрачная).

В отраженном свете рассматривают колонии со стороны крышки, не открывая ее, и отмечают:

а) цвет колоний (бесцветная, пигментированная, цвет пигмента);

б) поверхность (гладкая, блестящая, влажная или морщинистая, матовая, сухая и др.);

в) положение колонии на питательной среде (возвышающаяся над средой, погруженная в среду, на уровне среды – плоская, плотно прилегающая к среде – уплощенная).

2. Микроскопическое изучение колоний. Чашку устанавливают вверх дном на предметном столике микроскопа, опускают конденсор и объективом х8 изучают структуру и края колоний:

а) характер краев (ровные, волнистые, зазубренные, бахромчатые и др.);

б) структура колоний (гомогенная, аморфная, зернистая, волокнистая и др.)

9.2. Культуральные свойства бактерий в жидких питательных средах

Рост бактерий в жидких питательных средах характеризуется следующими признаками. Не встряхивая содержимое пробирки с посевом, вначале обращают внимание на поверхностный рост, который может быть в виде пристеночного кольца или пленки по всей поверхности среды. По своему характеру пленка может быть нежная или грубая, складчатая или ровная; по консистенции – хрупкая, слизистая, сальная.

Отмечают также характер и степень помутнения среды, которое может быть незначительное (в виде опалесценции), слабое, умеренное и интенсивное.

Многие бактерии на жидких питательных средах образуют на дне пробирки осадок, который выявляется при легком встряхивании пробирки. Он может быть незначительным или обильным, зернистым, хлопьевидным, слизистым, крошковидным и т.д.

Ряд бактерий образует водорастворимые пигменты, которые равномерно окрашивают питательную среду в сине-зеленый, ярко-красный и желтый цвета.

После изучения культуральных свойств выделяемых бактерий на плотной питательной среде из отдельной колонии готовят мазок и окрашивают по Граму. Проводят микроскопию. Из этой же колонии делают пересев на скошенный МПА и МПБ для выделения чистой культуры бактерий (2-й день исследования).

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить культуральные свойства кишечной палочки, стафилококка и вакцинного штамма сибиреязвенной палочки на МПА.

2. Отметить характерные колонии для указанных видов бактерий, сделать из них препарат, окрасить по Граму, провести микроскопию. Из этой колонии произвести пересев на свежие питательные среды: на скошенный МПА и МПБ для выделения чистой культуры бактерий (2-й день исследования).

3. Изучить культуральные свойства бактерий на МПБ (демонстрационные культуры).

4. Полученные результаты внести в бланки экспертизы.

Вопросы для самоподготовки и контроля знаний

1. Что входит в понятие «культуральные свойства бактерий»?

2. Какие признаки принимают во внимание при характеристике роста бактерий на плотных и жидких питательных средах?

3. Дайте характеристику роста кишечной палочки, стафилококка, вакцинного штамма сибиреязвенной палочки на плотных и жидких питательных средах.

Тема 10. Ферментативные (биохимические) свойства бактерий

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Ознакомитъ студентов с методами определения ферментативной активности бактерий, используемыми для идентификации. Освоить методы определения биохимических свойств бактерий.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Посевы, сделанные на предыдущем занятии по выделению чистых культур стафилококка, кишечной палочки и вакцинного штамма сибиреязвенной палочки. Бактериологические петли, спиртовки, предметные стекла, набор красок для окрашивания по Граму. Демонстрационные культуры бактерий, посеянные на среды для определения ферментативной активности – на сахаролитические свойства: среда Эндо, Левина, Плоскирева, Гисса; на протеолитические свойства: молоко, МПЖ, свернутая кровяная сыворотка с целью определения сероводорода, аммиака, индола; на гемолитические свойства: кровяные МПА, МПБ; каталазы, плазмокоагуляции и ДНК-азы.

Разные виды бактерий имеют различный набор ферментов. Это обстоятельство послужило основой включения ферментативных свойств бактерий в группу признаков для их идентификации.

В зависимости от субстрата, который расщепляют бактерии, ферментативные свойства условно подразделяются на: сахаролитические, протеолитические, гемолитические, восстанавливающие свойства, каталазную активность и др.

1. Определение ферментации углеводов

Для такого определения чистую культуру бактерий засевают на дифференциально-диагностические среды, в состав которых входят различные углеводы и индикаторы.

В зависимости от изучаемого рода и вида бактерий выбирают среды с соответствующими моно- и дисахаридами (глюкоза, лактоза, мальтоза, сахароза и др.), полисахаридами (крахмал, гликоген, инсулин и др.), высшими спиртами (глицерин, маннит и др.). В процессе ферментации бактерии образуют конечные продукты: альдегиды, кислоты и газообразные продукты (СО₂, Н₂, СН₄).

Для определения ферментативных свойств используют питательные среды: полужидкие с индикатором ВР, жидкие (среда Гисса) и плотные (среды Эндо, Левина, Дригальского и др.).

В полужидкие среды с индикатором ВР посев производится петлей, опущенной до дна пробирки. В результате ферментации углеводов индикатор изменяет свою окраску, а пузырьки газа распределяются в питательной среде и в связи с ее вязкостью могут некоторое время сохраняться в среде.

В жидких питательных средах изменения устанавливают также по изменению цвета индикатора, а образование газа – с помощью поплавка (небольшая пробирка помещается вверх дном), в котором появляется пузырек газа.

При отсутствии ферментации цвет среды не меняется. Поскольку бактерии ферментируют не все, а только некоторые углеводы, входящие в состав сред Гисса, то наблюдается довольно пестрая картина. Поэтому набор сред с углеводами и цветным индикатором был назван «пестрым» рядом (рис. 29).

Для дифференциации микроорганизмов семейства энтеробактерий широко используется их способность расщеплять различные углеводы с образованием кислоты и газа.

Рис. 29. Среда Гисса в пробирках с «поплавками» для изучения сахаролитических свойств бактерий: до посева (А), ферментация углевода с образованием кислоты Б (изменение цвета индикатора), образованием кислоты и газа В (изменение цвета индикатора и накопление газа в «поплавке»)

На плотных дифференциально-диагностических средах, в состав которых входят углеводы и индикатор, вырастают колонии, имеющие различную окраску. Например, кишечная палочка, ферментирующая лактозу, на среде Эндо образует ярко-красные колонии; сальмонеллы, не ферментирующие лактозу, на этой среде образуют бесцветные или слегка розоватые колонии.